Page 57 - 《中国药房》2022年4期
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红染色后观察心肌组织的病理变化（图1）。数据以 x±s                        离心10 min，弃去上清液，沉淀加入1 mol/L盐酸15 μL、
        表示，采用 SPSS 18.0 软件进行 t 检验，检验水准α＝                   乙酸乙酯500 μL，涡旋混匀3 min，超声10 min，以14 000
        0.05。模型验证结果显示，正常组和模型组大鼠血清中                         r/min 离心 10 min，取上清液，再重复“加入 1 mol/L 盐酸
        AST 水平分别为（1.70±0.11）、（9.88±1.09）U/L（n＝             15 μL……离心 10 min”操作 2 次，合并 3 次上清液，于
        3），CK-MB 水平分别为（11.08±0.56）、（13.57±0.54）            30 ℃下以氮气流吹干，残渣加 8％乙腈 150 μL 复溶，取
        ng/mL（n＝3），模型组 AST、CK-MB 水平均显著高于正                  上清液进样分析。
        常组（P＜0.05）。由图 1 可见，与正常组比较，模型组大                     2.4 色谱与质谱条件
        鼠心肌变性坏死病灶广泛，可见部分炎症细胞浸润、成                           2.4.1  色谱条件      以 Waters BEH C18 （2.1 mm×50 mm，
        纤维细胞增生、血栓形成，说明AMI模型造模成功。                           1.7 μm）为色谱柱，Waters Van Guard BEH C18 （2.1 mm×
                                                           50 mm，1.7 μm）为保护柱；以0.1％甲酸溶液（A）-0.1％甲
                                                           酸乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～1.0 min，
                                                           8％B；1.0～1.5 min，8％B→30％B；1.5～2.0 min，30％B→
                                                           40％B；2.0～2.5 min，40％B→90％B；2.5～3.0 min，90％B；
                                                           3.0～4.0 min，90％B→8％B）；流速为 0.35 mL/min；柱温
                                                           为40 ℃；进样量为1 μL。

                                                           2.4.2  质谱条件      由于 SGI 中各化合物的含量差异较
                                                           大，同一仪器不能兼顾所有成分的测定，故本研究采用
                            A.正常组                          仪器Ⅰ测定盐酸川芎嗪，采用仪器Ⅱ测定丹参素、迷迭
                                                           香酸。具体条件如下：离子源均为电喷雾电离源，离子
                                                           源温度均为 120 ℃；毛细管电离电压均为 3 kV；去溶剂
                                                           气流速均为 650 L/h，去溶剂气温度均为 350 ℃；反吹气
                                                           均为氮气，流速均为50 L/h；碰撞气均为氩气，流速均为
                                                           0.16 mL/min；扫描方式均为选择离子检测；质谱数据采
                                                           集及处理软件均为 Masslynx 4.1 工作站。仪器Ⅰ中，用
                                                           于定量分析的离子对分别为 m/z 137.1→55.1（盐酸川芎
                                                           嗪）、m/z 449.1→250.9（内标），锥孔电压分别为40、25 V，
                            B.模型组                          碰撞电压分别为20、30 V；仪器Ⅱ中，用于定量分析的离
           →：病灶区域                                          子 对 分 别 为 m/z 197.5→162.7（丹 参 素）、m/z 359.0→
        图1   大鼠心肌组织病理观察的显微镜图（苏木精-伊红                        197.0（迷迭香酸）、m/z 449.1→250.9（内标），锥孔电压分
             染色，×100）                                      别为25、20、25 V，碰撞电压分别为20、20、30 V。

            取正常组和模型组剩余 6 只大鼠，单次尾静脉注射                       2.5  方法学考察
        SGI（12 mL/kg，参照临床 SGI 成人单日静脉滴注剂量                   2.5.1  专属性考察       取大鼠空白血浆，除不加内标外其
        100～200 mL进行换算，相当于盐酸川芎嗪9.880 mg/kg、                余按“2.3”项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分
        丹参素 2.772 mg/kg、迷迭香酸 0.036 mg/kg）或等体积              析，记录色谱图（图 2A、图 2D）；将盐酸川芎嗪、丹参素、
        生理盐水。分别于给药后 0.083、0.167、0.333、0.5、0.75、            迷迭香酸质量浓度分别为1.87、0.32、0.19 μg/mL的对照
        1、1.5、2、3、5 h经眼眶静脉丛取血约0.3 mL，置于涂有肝                 品溶液加至空白血浆中，按“2.3”项下方法处理后，再按
        素的塑料离心管中，以6 000 r/min离心6 min，取上层血                 “2.4”项下条件进样分析，记录色谱图（图 2B、图 2E）；取
        浆，于－20 ℃下保存，备用。                                    模型组大鼠注射 SGI 后 5 min 采集的血浆样品，按“2.3”
        2.3 血浆样品处理                                         项下方法处理后，再按“2.4”项下条件进样分析，记录色
            取血浆样品 50 μL，加入甲醇 25 μL、乙腈 200 μL 和             谱图（图2C）。由图2可见，盐酸川芎嗪、丹参素、迷迭香
        内标溶液（测定盐酸川芎嗪时，内标溶液的质量浓度                            酸及内标的保留时间分别为 1.04、0.75、1.84、1.55 min，
        为 10.52 μg/mL；测定丹参素、迷迭香酸时，内标溶液的                    各色谱峰分离良好，内源性杂质不干扰待测成分的检
                                                                                               [10]
        质量浓度为 0.105 μg/mL）10 μL，涡旋混匀 3 min，超声              测，符合2020年版《中国药典》的相应要求 。
       （功率300 W，频率40 kHz，下同）10 min，以14 000 r/min           2.5.2  标准曲线绘制和定量下限考察                按“2.1.1”项下


        中国药房    2022年第33卷第4期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4  ·435 ·
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