Page 45 - 《中国药房》2022年3期

菌、抗病毒作用，也可认为是连翘发挥功效的主要有效
1 800
1 700 成分 [7－10] 。基于此，笔者将这4种成分作为连翘Q-marker
1 600
1 500 的候选成分。
1 400 2.2 连翘挥发油的GC-MS图谱建立
信号/mV 1 200 2.2.1 色谱条件 色谱柱为 HP-5MS（30 m×0.25 mm，
1 000
800 0.25 µm）；进样温度为 200 ℃；载气为氮气；分流比为
600
400 20 ∶1；流速为1 mL/min；进样量为1 µL；采用程序升温方
200 式（50 ℃保持 5 min；以 0.75 ℃/min 升至 65 ℃，保持 5
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 min；以5 ℃/min升至105 ℃，保持2 min；以20 ℃/min升
时间/min
至225 ℃，保持4 min）。
图1 10批连翘药材的叠加HPLC指纹图谱
2.2.2 质谱条件 离子源为电轰击离子源；电子能量为
480 70 eV；接口温度为250 ℃；离子源温度为200 ℃；四极杆
440
400 温度为 150 ℃；电子倍增电压为 1 906 V；质量扫描范围
360 为50～550 amu。
320 2.2.3 挥发油供试品溶液制备 取连翘粉末50 g，精密
280
信号/mV 240 称定，置于1 L圆底烧瓶中，加水500 mL浸泡0.5 h，然后
200
[11]
160 采用水蒸气蒸馏法连续回流 6 h ；收集挥发油，加适量
120
80 无水硫酸钠粉末干燥，除去固体不溶物，即得连翘挥发
40 油（得率为 0.94％～1.62％）。移取连翘挥发油 0.4 mL，
0
置于 10 mL 量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，过
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
时间/min 0.22 μm微孔滤膜，即得挥发油供试品溶液。
图2 连翘药材的对照指纹图谱R 2.2.4 精密度试验 取连翘挥发油供试品溶液（编号
S10），按“2.2.1”与“2.2.2”项下条件连续进样6次，记录色
表1 10批连翘药材指纹图谱的相似度评价结果
谱图。以3号峰为参照峰，计算各峰峰面积。结果显示，
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱R
S1 1.000 0.992 0.973 0.962 0.984 0.988 0.979 0.957 0.969 0.940 0.986 各峰峰面积RSD均小于0.2％，表明仪器精密度良好。
S2 0.992 1.000 0.972 0.963 0.997 0.997 0.996 0.974 0.986 0.928 0.995 2.2.5 重复性试验 取连翘药材S10样品平行制备6份
S3 0.973 0.972 1.000 0.995 0.968 0.962 0.956 0.987 0.982 0.987 0.989 挥发油供试品溶液，按“2.2.1”与“2.2.2”项下条件进样分
S4 0.962 0.963 0.995 1.000 0.959 0.953 0.946 0.984 0.980 0.987 0.983
S5 0.984 0.997 0.968 0.959 1.000 0.995 0.993 0.974 0.985 0.922 0.992 析，记录色谱图。以3号峰为参照峰，计算各峰峰面积。
S6 0.988 0.997 0.962 0.953 0.995 1.000 0.994 0.965 0.979 0.913 0.989 结果显示，各峰峰面积RSD均小于0.1％，表明该方法重
S7 0.979 0.996 0.956 0.946 0.993 0.994 1.000 0.969 0.985 0.902 0.988 复性良好。
S8 0.957 0.974 0.987 0.984 0.974 0.965 0.969 1.000 0.995 0.962 0.990 2.2.6 稳定性试验 取连翘挥发油供试品溶液（编号
S9 0.969 0.986 0.982 0.980 0.985 0.979 0.985 0.995 1.000 0.948 0.996
S10 0.940 0.928 0.987 0.987 0.922 0.913 0.902 0.962 0.948 1.000 0.956 S10），于室温放置0、2、4、8、12、24 h后，按“2.2.1”与“2.2.2”
对照指纹图谱R 0.986 0.995 0.989 0.983 0.992 0.989 0.988 0.990 0.996 0.956 1.000 项下条件进样分析，记录色谱图。以3号峰为参照峰，计
算各峰峰面积。结果显示，各峰峰面积 RSD 均小于
80
0.2％，表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。
60
mAU 40 2.2.7 GC-MS 图谱分析 取“2.2.3”项下连翘挥发油供
试品溶液，按“2.2.1”与“2.2.2”项下条件进样分析，得到
20
0
连翘挥发油成分的 GC-MS 总离子流图（图 4）。然后将
－20
0 10 20 30 40 50 60 70 所得质谱数据通过质谱工作站标准数据库检索、匹配
时间/min
后，确定各成分的化学结构，通过与各样品图谱对比，得
13：芦丁；15：连翘酯苷A；16：松脂素-β-D-葡萄糖苷；18：连翘苷 到连翘挥发油 7 个成分，分别为β-蒎烯（β-pinene）、α-蒎
图3 混合对照品溶液的HPLC图谱 烯（α-pinene）、松油烯-4-醇（terpinen-4-ol）、柠檬烯（limo-
连翘酯苷A（forsythoside A）、16号峰为松脂素-β-D-葡萄 nene）、γ- 松 油 烯（γ-terpinene）、α- 水 芹 烯（α-phellan-
糖苷（pinoresinol-4-O-β-D-glucoside）、18 号峰为连翘苷 drene）、β-月桂烯（β-myrcene）。采用峰面积归一化法进
（phillyrin）。经笔者查询发现，2020 年版《中国药典》连 行定量分析，得出上述7个连翘挥发油成分的相对百分
翘含量测定项下规定了连翘苷、连翘酯苷A的含量 ，由 含量总和约 80％（表 2），表明这 7 个成分在连翘挥发油
[1]
此可认为这两者是连翘质量的指标性成分。相关研究 中的代表性较强，可作为连翘挥发油 Q-marker 的候选
发现，芦丁、松脂素-β-D-葡萄糖苷具有显著的抗炎、抗 成分。

中国药房 2022年第33卷第3期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3 ·295 ·