Page 44 - 《中国药房》2022年3期
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药典》连翘含量测定项下仅对连翘苷、连翘酯苷A、总挥                           50 min，29.2％B→35％B；50～63 min，35％B→40％B；
                    [1]
        发油进行控制 ，而连翘中含有的化学成分复杂，挥发性                           63～69 min，40％B→48％B；69～75 min，48％B→53％B；
        成分缺乏细致研究，其主要活性成分及作用靶点尚不明                            75～80 min，53％B→60％B）；检测波长为 242 nm；流速
        确，无法反映中药多成分、多靶点、整体性的特点。因                            为1 mL/min；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。
        此，如何制定合理的连翘质量标准、保障连翘药材质量，                           2.1.2  供试品溶液的制备         取10批连翘药材，粉碎过四
        是亟待解决的问题。                                           号筛，精密称定 1.5 g 粉末，置于具塞锥形瓶中，加入
            中药指纹图谱可以对化学成分进行较全面控制                    [4－5] ，  70％甲醇 20 mL，密塞，称定，超声提取（频率 40 kHz，功
        而网络药理学基于数据库，以“网络靶标”为核心，可对                           率 300 W）30 min；放冷，称定，用 70％甲醇补足减失质
        中药成分、靶点、通路进行梳理分析 ，因此两者相结合                           量，摇匀，以5 000 r/min离心5 min；取上清液，过0.22 μm
                                       [6]
        既可以从整体上控制药材质量，也可以揭示中药发挥其                            微孔滤膜，取续滤液，即得。
        功效的物质基础及途径。基于此，本研究采用高效液相                            2.1.3  混合对照品溶液的制备             取连翘苷、连翘酯苷
        色谱（HPLC）法建立连翘药材的指纹图谱，采用气相色                          A、松脂素-β-D-葡萄糖苷、芦丁对照品，精密称定，加甲
        谱-质谱联用技术（GC-MS）对连翘挥发油成分进行分                          醇振摇、溶解制成含连翘苷 84 μg/mL、连翘酯苷 A 174
        析，再利用网络药理学方法对连翘成分、靶点、通路进行                           μg/mL、松脂素-β-D-葡萄糖苷128 μg/mL、芦丁 92 μg/mL
        整理分析，并预测其潜在的质量标志物（quality marker，                   的混合对照品溶液。
        Q-marker），旨在为连翘质量控制提供参考。                            2.1.4  精密度试验      取连翘供试品溶液（编号 S10），按
        1 材料                                               “2.1.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以15
        1.1 主要仪器                                            号峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰
            本研究所用主要仪器有：1260 InfinityⅡ型 HPLC                 面积。结果显示，各共有峰相对保留时间 RSD 均小于
        仪 、7890B/7000D 型 GC-MS 仪（美 国 Agilent 公 司），          0.23％，相对峰面积 RSD 均小于 3.86％，表明仪器精密
        FW-80 型高速万能粉碎机、DZTW 型电子调温电热套                        度良好。
        （北京市永光明医疗仪器有限公司），FA2004B型万分之                        2.1.5  重复性试验      取连翘药材S10样品平行制备6份
        一电子天平（上海天美天平仪器有限公司），KQ-500DB                        供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录色
        型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），                             谱图。以15号峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时
        TDL-5-A型离心机（上海安亭科学仪器厂）。                             间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间
        1.2  主要药品与试剂                                        RSD 均小于 1.03％，相对峰面积 RSD 均小于 3.14％，表
            连翘苷（批号 Z27A9X59731）、连翘酯苷 A（批号                   明该方法重复性良好。
        Z10N9L71605）、松脂素-β-D-葡萄糖苷（批号 M25GB-                 2.1.6  稳定性试验      取连翘供试品溶液（编号 S10），于
        142883）、芦丁（批号 Y24F11Y17051）的对照品（纯度均                 室温放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.1”项下色谱条件进
        大于 98％）购自上海源叶生物科技有限公司；无水硫酸                          样分析，记录色谱图。以 15号峰为参照峰，计算各共有
        钠（分析纯，批号 F20110307）购自国药集团化学试剂有                      峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰
        限公司）；乙酸乙酯（分析纯，批号20170816）购自天津市                      相对保留时间RSD均小于0.22％，相对峰面积RSD均小
        富宇精细化工有限公司；甲醇、甲酸均为色谱纯；水为娃                           于 3.41％，表明供试品溶液在室温放置 24 h 内稳定性
        哈哈饮用纯净水。                                            良好。
            本研究所用 10 批连翘药材（均为青翘，编号 S1～                      2.1.7  指纹图谱建立       取10批连翘药材，按“2.1.2”项下
        S10）购自不同产地（S1、S4 样品购自山西，S2 样品购自                     方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样分
        河北，S3 样品购自江西，S5 样品购自陕西商洛，S6～S8                      析，记录色谱图。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价
        样品购自安徽亳州，S9 样品购自四川，S10 样品购自山                        系统（2012年版）》，以S1样品的色谱图作为参照图谱，运
        东泰安），经山东中医药大学药学院李峰教授鉴定，符合                           用中位数法，将时间窗宽度设置为0.1 min，然后生成10
        2020年版《中国药典》规定，均为木犀科植物连翘F. sus-                     批连翘药材的叠加HPLC指纹图谱（图1）和连翘药材的
        pensa（Thunb.）Vahl的干燥果实。                             对照指纹图谱R（图2）；并进行相似度评价，得到10批连
        2 方法与结果                                             翘药材指纹图谱的相似度在0.902～0.997范围内（表1）。
        2.1 连翘HPLC指纹图谱的建立                                   2.1.8  共有峰指认      取“2.1.3”项下混合对照品溶液，按
        2.1.1  色谱条件      色谱柱为ZORBAX SB-C18 （250 mm×        “2.1.1”项下色谱条件进样分析，得到混合对照品溶液色
        4.6 mm，5 μm）；流动相为 0.2％甲酸溶液（A）-甲醇（B）                 谱图（图3）。
        （梯 度 洗 脱 ：0～15 min，10％ B→20％ B；15～30 min，               由图 1 可知，10 批连翘药材有 21 个共有峰，通过与
        20％B→26.5％B；30～31 min，26.5％B→29.2％B；31～             图 3 进行比对，指认出 13 号峰为芦丁（rutin）、15 号峰为


        ·294 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3                                    中国药房    2022年第33卷第3期
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