Page 77 - 《中国药房》2021年22期

表3 吗啡等5个成分的加样回收率试验结果（n＝6） 3 讨论
Tab 3 Results of recovery tests of 5 components such 3.1 色谱条件的选择
as morphine（n＝6） 3.1.1 检测波长的选择 有文献报道，吗啡、可待因、蒂
待测成分 样品含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ 巴因、罂粟碱、那可丁含量测定的检测波长为 250、216
吗啡 1.454 0 1.467 4 2.921 7 100.02 99.46 1.08 [20]
1.448 0 1.467 4 2.889 0 98.20 nm 。本研究参考上述文献，采用紫外全波长扫描结合
1.452 0 1.467 4 2.906 7 99.13 波长切换，分别在250、238、216 nm波长条件下以二极管
1.455 0 1.467 4 2.940 6 101.24 阵列检测器进行检测。结果显示，吗啡、可待因、蒂巴
1.439 0 1.467 4 2.887 3 98.70
1.464 0 1.467 4 2.923 2 99.44 因、那可丁的最大吸收波长为 216 nm，罂粟碱的最大吸
可待因 0.355 3 0.355 9 0.706 0 98.54 97.84 1.55 收波长为 238 nm，故本研究选择 216 nm 为吗啡、可待
0.354 0 0.355 9 0.709 0 99.75 因、蒂巴因、那可丁的检测波长，238 nm为罂粟碱的检测
0.355 0 0.355 9 0.7073 98.99
0.355 8 0.355 9 0.702 9 97.53 波长。
0.351 8 0.355 9 0.694 0 96.15 3.1.2 流动相的选择 本课题组前期曾采用 Agilent
0.358 0 0.355 9 0.699 9 96.07
蒂巴因 0.040 0 0.039 9 0.076 0 90.23 91.10 1.74 ZORBAX Eclipse C18 色谱柱分别考察了以甲醇-0.01
0.039 8 0.039 9 0.075 7 89.97 mol/L 磷酸二氢钾溶液 、甲醇-0.1％磷酸溶液 、甲
[12]
[21]
0.039 9 0.039 9 0.076 7 92.23 醇-0.5％乙酸铵溶液和乙腈-0.5％乙酸铵溶液 [22－23] 为流动
0.040 0 0.039 9 0.075 5 88.97
0.039 6 0.039 9 0.076 4 92.23 相体系的分离效果，后又采用正向分离系统，使用Venusil
0.040 3 0.039 9 0.077 4 92.98 HILIC色谱柱考察了以0.1％甲酸溶液-乙腈和10 mmol/L
罂粟碱 0.222 1 0.224 4 0.436 3 95.45 96.43 1.25 [24－26]
0.221 3 0.224 4 0.437 9 96.52 甲酸铵溶液-乙腈 为流动相体系的分离效果。结果
0.221 9 0.224 4 0.442 0 98.08 显示，上述流动相体系均未取得良好的分离效果。采用
0.222 4 0.224 4 0.441 3 97.55 甲醇-水为流动相体系，并添加离子对试剂（庚烷磺酸
0.219 9 0.224 4 0.435 3 95.99
0.223 7 0.224 4 0.436 9 95.01 钠），再用磷酸调节 pH 以改善峰形。结果显示，在
那可丁 0.222 1 0.225 6 0.436 5 95.04 94.82 1.20 “2.1.1”项色谱条件下，吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那
0.221 3 0.225 6 0.439 1 96.54
0.221 9 0.225 6 0.433 3 93.71 可丁的色谱图基线平稳，色谱峰峰形对称、分离良好，相
0.222 4 0.225 6 0.437 9 95.52 邻色谱峰分离度均大于1.5。
0.219 9 0.225 6 0.431 0 93.57 3.1.3 柱温的选择 本课题组前期考察了不同柱温
0.223 7 0.225 6 0.437 0 94.55
（20、25、30 ℃）对吗啡等 5 个待测成分分离效果的影
粉末，每份约0.5 g，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，
响。结果显示，当柱温为30 ℃时，蒂巴因的色谱峰未能
再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外
与相邻色谱峰有效分离；当柱温为25 ℃时，蒂巴因的色
标法计算样品含量。每个样品平行测定 3 次，结果见
谱峰亦未实现基线分离；而当柱温为 20 ℃时，吗啡等 5
表4。
个待测成分均能完全分离。
表4 15批罂粟壳药材的含量测定结果（mg/g，n＝3）
3.2 指纹图谱和聚类分析结果的探讨
Tab 4 Results of content determination of 15 batches
本研究建立了罂粟壳药材的 HPLC 指纹图谱，结果
of Papaveris Pericarpium（mg/g，n＝3）
显示，15批罂粟壳药材样品中共有13个共有峰；通过与
编号 吗啡 可待因 蒂巴因 罂粟碱 那可丁
S1 3.580 1 0.889 7 0.089 8 0.558 8 0.562 1 混合对照品比对，指认了其中5个色谱峰，分别为吗啡、
S2 3.579 4 0.740 5 0.059 3 0.487 2 0.629 4 可待因、那可丁、罂粟碱和蒂巴因；样品的指纹图谱与对
S3 3.862 1 0.751 1 0.062 1 0.537 0 0.590 0
S4 3.498 0 0.770 1 0.087 6 0.487 2 0.476 9 照指纹图谱的相似度均大于0.99，表明15批样品成分相
S5 4.082 2 0.825 4 0.090 4 0.494 9 0.656 2 似。聚类分析结果显示，15批罂粟壳药材样品可聚为两
S6 3.500 9 0.741 8 0.066 9 0.444 6 0.580 6 类，S1～S7 聚为一类，S8～S15 聚为一类，分属 2 个地
S7 3.775 4 0.879 6 0.084 7 0.495 4 0.560 7
S8 2.786 8 0.535 2 0.066 5 0.362 7 0.456 5 市。本课题组前期调研发现，FA、FB、FC 等 3 个农场分
S9 2.590 4 0.568 1 0.090 0 0.340 5 0.403 0 布于同一地市，FD、FE 农场分布于同一地市，聚类分析
S10 2.762 9 0.576 2 0.070 8 0.382 8 0.429 8 结果与产地调研结果一致。
S11 2.617 1 0.485 9 0.085 7 0.322 1 0.409 5
S12 2.973 6 0.537 4 0.061 4 0.382 0 0.487 6 3.3 含量测定结果的分析
S13 2.716 4 0.530 1 0.067 3 0.393 7 0.431 6 本研究对甘肃境内 5 个不同农场的 15 批罂粟壳药
S14 2.680 2 0.526 9 0.073 4 0.299 3 0.482 7
S15 2.342 9 0.430 4 0.055 2 0.529 6 0.343 2 材样品中吗啡等5个成分的含量进行测定，结果显示，不
平均值 3.156 6 0.652 6 0.074 1 0.434 5 0.500 0 同批次罂粟壳中5个成分的含量大小依次为吗啡、可待

中国药房 2021年第32卷第22期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 ·2759 ·