Page 62 - 《中国药房》2021年22期
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中的主要药效成分葛根素、3′-甲氧基葛根素和大豆苷为                          析纯，水为重蒸水。
        异黄酮类成分，具有降血压、降血脂、降血糖等多种药理                               正心降脂片[批号分别为 200401、200402、200403、
        作用  [2－4] ；槐米中的主要成分芦丁具有改善心肌缺氧、降                     200904、200905、200906、201208、201209、201210、
        低胆固醇、抑制血小板集聚、保护神经等药理作用                    [5－6] ，槲  201211（编号依次为S1～S10），规格为0.31 g/片（薄膜衣
        皮素具有抗炎、抗氧化、减轻心肌细胞氧化损伤等作                             片）；S1～S3 样品的生产时间为 2020 年 4 月，S4～S6 为
        用 [7－8] ；陈皮中的橙皮苷是生物类黄酮化合物之一，有研                      2020 年 9 月，S7～S10 为 2020 年 12 月]均购自西安正大
        究证实橙皮苷具有抗炎、抗氧化应激、降血脂、软化血                            制药有限公司。
        管、抗过敏等药理作用 ；丹酚酸A是丹参的主要活性成                           2 方法与结果
                            [9]
        分之一，具有降血糖、保护心脏等作用 。上述化学成                            2.1 色谱条件
                                          [10]
        分的药理活性均与冠心病的治疗相关，且本课题组前期                                以 Kromasil C18 （150 mm×4.6 mm，3.5 μm）为色谱
        预实验结果表明，正心降脂片中葛根素、3′-甲氧基葛根                          柱，以乙腈（A）- 0.1％甲酸溶液（B）为流动相进行梯度洗
        素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸 A 和槲皮素的含量相                         脱（0～40 min，5％A→40％A）；流速为0.8 mL/min；检测
        对较高，可能是该药的主要活性成分。目前，2020 年版                         波长为280 nm；柱温为25 ℃；进样量为10 μL。
        《中国药典》（一部）“正心降脂片”含量测定项下仅有葛                          2.2 溶液的制备
                               [11]
        根素这一指标。蓝日春等 建立了正心降脂片中丹参                             2.2.1  混合对照品溶液        分别称取葛根素、3′-甲氧基葛
                                    [12]
        酮ⅡA的含量测定方法，李志平等 建立了正心降脂片中                           根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸 A 和槲皮素对照品
        羊红膻、决明子和黄芪等 3 味药材中 7 种成分的含量测                        适量，精密称定，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀
        定方法，但均是以某一味或者少数几味药材中的若干成                            释，制成上述各成分质量浓度分别为 170.00、51.40、
        分作为质量控制的指标。鉴于中药制剂的质量控制应                             30.00、1 530.00、78.75、28.50、113.40 μg/mL 的混合对照
        体现中药多组分、多途径协同作用的特点 ，因此现有                            品溶液。
                                             [13]
                                                            2.2.2  供试品溶液       取正心降脂片，除去薄膜衣后粉
        研究难以全面反映正心降脂片的综合质量。
                                                            碎，精密称取上述样品粉末 0.2 g，置于 50 mL 具塞三角
            聚类热图法可对数据进行筛选、提取和降维，有利
                                                            瓶中，加入75％甲醇25 mL，称定质量，超声（功率400 W、
                                    [14]
        于发现数据间潜在的复杂关系 。该法除通过横向聚
                                                            频率 40 kHz）处理 30 min，放冷，再次称定质量，用 75％
        类来反映样品的关系外，还可以通过纵向聚类来反映化
                                                            甲醇补足减失的质量，摇匀，经 0.45 µm 微孔滤膜滤过，
        学成分的关系，并以热图颜色的深浅来反映样品中相应
                                                            取续滤液，即得。
        成分含量的高低，能直观呈现数据结果 。基于此，本
                                           [15]
                                                            2.2.3  阴性样品溶液        按正心降脂片处方工艺分别制
        研究采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定了正心降脂
                                                            备缺葛根、陈皮、槐米、丹参的阴性样品，再按“2.2.2”项
        片中葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹
                                                            下方法制备各阴性样品溶液。
        酚酸 A 和槲皮素的含量，并进行聚类热图分析，旨在为
                                                            2.2.4 空白对照溶液        以75％甲醇为空白对照溶液。
        全面评价该药的质量提供参考，亦为保证临床用药的安
                                                            2.3  系统适用性试验
        全有效提供依据。
                                                                取“2.2”项下各溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测
        1 材料
                                                            定，记录色谱图，结果见图 1。由图 1 可知，空白对照不
        1.1  主要仪器
                                                            干扰样品中各成分的测定，各成分、各成分与杂质峰均
            本研究所用主要仪器有1260型HPLC仪（美国Agilent                  可实现基线分离，分离度均大于1.5，理论板数按葛根素
        公司），KQ-400DE 型超声波清洗机（昆山市超声仪器有                       峰计均不低于8 000。
        限公司），BT25S 型十万分之一电子分析天平、BS210S                      2.4 线性关系考察
        型万分之一电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有                               分别精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液0.5、1.0、
        限公司]等。                                              2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于5 mL量瓶中，加75％甲醇稀释
        1.2 主要药品与试剂                                         至刻度，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，按
            大豆苷对照品（批号 wkq20041310）、芦丁对照品                   “2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各待测成
        （批号 wkq20030203）、3′-甲氧基葛根素对照品（批号                    分的质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐
        wkq20092106）均购自四川省维克奇生物科技有限公司，                      标进行线性回归。结果见表1。
        纯 度 均 大 于 98％ ；丹 酚 酸 A 对 照 品（批 号 MUST-              2.5 检测限与定量限考察
        2103311）、葛根素对照品（批号 MUST-21010610）、槲皮                    取“2.4”项下线性范围下限质量浓度的混合对照品
        素对照品（批号 MUST-16031804）、橙皮苷对照品（批号                    溶液（葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、
        MUST-21030701）均购自成都曼斯特生物有限公司，纯                      丹酚酸 A、槲皮素的质量浓度分别为 17.00、5.14、3.00、
        度均大于98％；乙腈、甲酸均为色谱纯，其余试剂均为分                          153.00、7.88、2.85、11.34 μg/mL），用75％甲醇逐级稀释，


        ·2744 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22                                 中国药房    2021年第32卷第22期
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