Page 80 - 《中国药房》2021年10期

均不高于 0.95％、相对峰面积的 RSD 均不高于 2.89％
（n＝6），表明该方法重复性良好。 162.95
2.2.5 稳定性试验 取同一份样品（编号 Y9）粉末适
119.23
量，按照“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，分别于室温 6
mV 1 2 4 7 8 9
下放置 0、2、6、10、12、24 h 时按照“2.1”项下色谱条件进 U， 75.51 3 5 10 11 Y10
Y9
Y8
样检测，记录色谱图。以4号峰为参照，分别计算各共有 Y7
31.79 Y6
Y5
峰的相对保留时间和相对峰面积。结果，各共有峰相对 Y4
Y3
Y2
Y1
保留时间的RSD均不高于2.21％、相对峰面积的RSD均 －11.93 0 10.15 20.29 30.44 40.58 50.73 60.88 71.02
不高于3.00％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置24 t，min
图 1 10 批不同产地水冬瓜叶的 HPLC 叠加指纹图谱
h内稳定。
Fig 1 HPLC superimposed fingerprint of 10 batches
2.2.6 10批水冬瓜叶HPLC指纹图谱的建立、相似度评
of the leaves of T. angulata from different re-
价及色谱峰的指认 分别取10批样品粉末，按照“2.2.2”
gions
项下方法制成供试品溶液。取“2.2.1”项下混合对照品
溶液及 10 批样品的供试品溶液，分别按照“2.1”项下色
谱条件进样测定，记录色谱图。然后，将10批样品的色 162.95
谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004 A
119.23
版）》中，以Y1样品的图谱为参照图谱进行共有峰匹配，
mV
设置时间窗宽度为 0.2 min，生成叠加图谱，采用中位数 U， 75.51
法生成对照指纹图谱（R），并进行相似度评价。通过比 31.79
对混合对照品色谱图（按同一色谱条件测得）和对照指 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
纹图谱（R）中各色谱峰的出峰时间，进行色谱峰的指 －11.93 0 10.15 20.29 30.44 40.58 50.73 60.88 71.02
认。结果，共得到 11 个共有成分峰，并指认出峰 4、5 分 t，min
图 2 10 批不同产地水冬瓜叶的 HPLC 对照指纹图谱
别为金丝桃苷和异槲皮苷。以色谱峰4（金丝桃苷）为参
（R）
照（Y）计算得到 11 个共有峰相对保留时间的 RSD 均不
Fig 2 HPLC control fingerprint（R）of 10 batches of
高 于 0.39％ ；相 对 峰 面 积 的 RSD 值 波 动 较 大 ，为
the leaves of T. angulata from different regions
27.05％～156.07％（除参照峰外）。以上结果表明，不同
产地水冬瓜叶中化学成分组成相似，但含量差异较大。
202.76
相似度评价结果显示，10批不同产地水冬瓜叶图谱与对
照指纹图谱（R）的相似度为0.923～0.983，表明不同产地 151.27
水冬瓜叶药材间化学成分种类相似度较高，药材质量整 mV U， 99.78
体稳定、可控。10 批不同产地水冬瓜叶 HPLC 叠加图 4 5
40.28
谱、对照指纹图谱分别见图1、图2，金丝桃苷和异槲皮苷
混合对照品的 HPLC 图见图 3，11 个共有峰相对保留时 －3.21 0 10.15 20.29 30.44 40.58 50.73 60.88 71.02
间、相对峰面积的测定结果分别见表 2、表 3，10 批不同 t，min
产地水冬瓜叶的相似度评价结果见表4。 注：4.金丝桃苷；5.异槲皮苷
Note：4. hyperoside；5. isoquercitrin
2.3 化学模式识别分析
图3 金丝桃苷和异槲皮苷混合对照品的HPLC图谱
2.3.1 聚类分析 以10批样品的11个共有峰峰面积为
Fig 3 HPLC chromatogram of hyperoside and iso-
变量，分别将其导入SPSS 25.0统计学软件中，采用组间
quercitrin mixed control
均联法，选择平方 Euclideam 距离为测度进行系统聚类
分析。结果显示，当分类距离约为 5 时，10 批样品可被 2.3.3 偏最小二乘法-判别分析 参照文献[17－18]，将
分为 2 类：其中，编号为 Y10 的样品单独聚为一类；其他 10 批样品的 11 个共有峰峰面积导入 SIMCA-P+12.0.0.0
批次的样品聚为另一类。10 批不同产地水冬瓜叶的聚 软件中进行偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA），绘制
类分析树状图见图4。 PLS-DA 散点得分图。结果显示，10 批样品大致可聚为
2.3.2 主成分分析 将10批样品的11个共有峰峰面积 2 类，与聚类分析结果基本一致；所建模型变量解释度
2
2
导入SIMCA-P+12.0.0.0软件中进行主成分分析（PCA）， R Y 为 0.945，模型预测度 Q 为 0.902，表明此模型稳定、
绘制 PCA 得分散点图。结果显示，10 批样品大致可聚 可靠。10 批不同产地水冬瓜叶的 PLS-DA 散点得分图
为2类，与聚类分析结果基本一致。10批不同产地水冬 见图6。
瓜叶的PCA得分散点图见图5。 为找出10批样品中差异贡献度大的成分，提取了模

·1226 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10 中国药房 2021年第32卷第10期