Page 26 - 《中国药房》2021年8期
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基质过度沉积等 。目前研究认为，纤维化期是肾病治                            抗大鼠 Wnt5a 单克隆抗体（批号 bs-1948R）、兔抗大鼠
                       [3]
        疗的关键时期，若患者在此时期能得到及时、有效的治                            Wnt5b 单克隆抗体（批号 bs-8010R）、兔抗大鼠β-catenin
        疗，便能有效缓解其疾病进展，从而提高患者生活质                             单克隆抗体（批号 bs-1165R）均购自北京博奥森生物技
          [4]
        量 。                                                 术有限公司；兔抗大鼠β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体
            中医学认为，RIF的主要病机为肾脉瘀阻，其中瘀血                       （批号GB12001）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔
                         [5]
        是主要的致病因素 。因此，可采用祛瘀通肾法进行治                            免疫球蛋白G（IgG）二抗（批号GB23303）均购自武汉塞
        疗，发挥活血祛瘀、恢复肾气、改善肾脏缺血状态、调节                           维尔生物科技有限公司；其余试剂均为分析纯或实验室
        微循环和肾血流动力学异常状态等作用，以减缓RIF的                           常用规格，水为蒸馏水。
        发展。丹参多酚酸盐为活血化瘀中药丹参 Salvia mil-                      1.3 动物
        tiorrhiza Bge.的主要活性成分，目前主要用于心脑血管                        健康 SPF 级 SD 大鼠 50 只，雄性，体质量 150～200
        疾病的治疗，其具有较好的抗氧化、促进血管新生等作                            g，购自河南省实验动物中心，生产许可证号为 SCXK-
          [6]
        用 。Wnt 蛋白/β-联蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路是目               （豫）2015-0004。动物购买后按啮齿类动物一级环境条
        前研究肾脏固有细胞转化成肌成纤维细胞（即上皮间质                            件饲养于河南中医药大学实验动物基地，实验过程依照
        转化调控机制）的主要通路之一，故可通过抑制 Wnt/                          河南中医药大学动物伦理委员会和国家实验动物管理
        β-catenin 信号通路活化来延缓肾纤维化进程              [7－9] 。鉴于    的相关规定进行。所有大鼠均以普通饲料适应性饲养
        此，本研究基于中医祛瘀通络的治疗理念，选用活血化                            14天后开始实验。
        瘀类常用中药丹参的活性成分丹参多酚酸盐对 RIF 模                          2 方法
        型大鼠进行干预，观察其对大鼠肾脏功能及纤维化的影                            2.1 分组、造模与给药
        响，并通过考察Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达情况                         将 50 只大鼠按体质量随机分为正常组、模型组、氯
        来探讨丹参多酚酸盐对 RIF 模型大鼠的改善作用及可                          沙坦组（阳性对照，9 mg/kg，成人临床用量的等效剂量）
        能机制，旨在为丹参多酚酸盐的临床应用提供参考。                             和丹参多酚酸盐低、高剂量组（18、36 mg/kg，分别为成
        1 材料                                                人临床用量的等效剂量和 2 倍等效剂量），每组 10 只。
        1.1  主要仪器                                           除正常组外，其余各组大鼠均按250 mg/kg灌胃2.5％的
            MR-96TB型酶标仪购自骋克仪器（上海）有限公司；                      腺嘌呤生理盐水混悬液以复制 RIF 模型：先每天灌胃 1
        YD-6D 型组织包埋机、YD-A 型组织摊片机、YD-B 型组                    次，连续12 天；然后改为隔天灌胃1次，连续12 天，共24
                                                              [1]
        织 烤 片 机 均 购 自 金 华 市 科 迪 仪 器 设 备 有 限 公 司 ；           天 ；正常组大鼠在造模期间同步灌胃等体积生理盐
        RM2235 型石蜡切片机购自德国 Leica 公司；D3024R 型                 水。造模结束后，各给药组大鼠灌胃相应药物（以生理
        台式高速冷冻微量离心机购自大龙兴创实验仪器（北                             盐水溶解），正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水；
        京）有限公司；DN260 型灭菌锅购自浙江新丰医疗器械                         灌胃体积均为10 mL/kg，每天1次，连续30天。
        有限公司；HWS-24 型水浴锅购自上海齐欣科学仪器有                         2.2  大鼠标本采集及处理
        限公司；SG-300 型显微镜购自苏州神鹰光学有限公司；                            末次给药后，收集各组大鼠24 h尿液。然后腹腔注
        ChemiScope 6200 Touch 型化学发光成像仪购自上海勤                 射氨基甲酸乙酯麻醉。于腹主动脉取血，血样以 3 000
        翔科学仪器有限公司。                                          r/min 离心 10 min，取上层血清。然后将大鼠处死，解剖
        1.2  主要药品与试剂                                        取其肾组织，以生理盐水冲洗后，一部分保存于4 ％多聚
            注射用丹参多酚酸盐[批号 18120224，规格每瓶装                     甲醛溶液中用于制作病理切片；另一部分保存于冻存管
        50 mg（含丹参乙酸镁40 mg）]购自上海绿谷制药有限公                      中，经液氮速冻后放入－80 ℃冰箱中冻存，用于Western
        司；氯沙坦钾片（批号429001，规格50 mg）购自重庆科瑞                     blot实验。
        制药（集团）有限公司；腺嘌呤（批号S18009）、Masson染                    2.3  大鼠血清中 Scr、BUN 水平和尿液中 24 h UPro 水
        色试剂盒（批号 G1340）均购自北京索莱宝科技有限公                         平检测
        司；血尿素氮（BUN）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒                           采用 ELISA 法以酶标仪检测血清中 Scr、BUN 水平
        （批 号 C011-1-1）、血 肌 酐（Scr）ELISA 试 剂 盒（批 号            和尿液中 24 h UPro 水平，具体操作严格按照相应试剂
        C013-1-1）、24 h 尿蛋白（24 h UPro）ELISA 试剂盒（批号           盒说明书方法进行。
        C035-2-1）均购自南京建成生物工程研究所；兔 SP 试剂                     2.4 大鼠肾脏病理组织学观察
        盒（批号 SP-9001）、DAB 显色试剂盒（批号 ZLI-9017）均               2.4.1  苏木精-伊红染色        取 4％多聚甲醛溶液固定的
        购自北京中杉金桥生物技术有限公司；BCA蛋白定量检                           肾组织适量，经脱水、透明、包埋后切片（厚度约4 μm），
        测试剂盒（批号C05-02001）、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰                      进行常规苏木精-伊红（HE）染色，然后在显微镜下进行
        胺电泳（SDS-PAGE）凝胶制备试剂盒（批号 C-0047）、兔                   观察。每张切片随机选出5个不重叠的肾皮质区，根据


        ·916 ·   China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8                                   中国药房    2021年第32卷第8期
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