Page 136 - 《中国药房》2021年07期
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GSK2945显示出较长的半衰期和良好的口服利用度；而                         质母细胞瘤干细胞（GSCs）中，KL001 增强了 CRY 稳定
        Compound 10、16、23 的半衰期较短，适用于短期急性注                   性和CRY-PER蛋白复合体对CLOCK-BMAL1异二聚体
        射治疗 。                                               的抑制作用，从而减少了关键钟基因的表达，使患者
              [32]
                                                                                              [42]
            SR8278是REV-ERB拮抗剂，通过抑制REV-ERB作                  GSCs发生了周期停滞，引起其凋亡增加 。口服KL001
        用使其靶基因Bmal1、G6Pase和Pepck的表达增加；细胞                    衍生物（Compound50、KL004）可延长 GSCs 移植小鼠的
        试验还发现，SR8278 能有效抑制葡糖糖诱导的胰岛素                         生存时间，提示 KL001 衍生物可能对肿瘤有抑制作用，
        释放，提示 REV-ERB 拮抗剂可在血糖调节方面发挥作                        同时也表明CRY蛋白对节律相关疾病的重要作用，为相
        用 。另一种小分子化合物 ARN5187 具有拮抗 REV-                      关疾病的药物开发提供了重要的靶点                 [42－43] 。构效关系
           [33]
        ERB和抑制细胞自噬的双重作用，对癌细胞产生明显的                           研究表明，KL001 的咔唑基是其保持活性的关键结构，
                                                 [34]
        细胞毒性效果，可为多效抗癌药的研发提供帮助 。                             此外含有甲烷磺酰胺和呋喃结构的 KL001 也比含有乙
        3.2.2  靶向 ROR    ROR 也是一种核受体，与 REV-ERB              酰胺和氯氰基苯基的KL044效果强10倍 。
                                                                                               [44]
        有着相似的DNA结合区域（DBDs）和各异的配体结合域                             通过表型筛选法确定了另一种 CRY 抑制剂——
        （LBDs），并能与胆固醇结合。ROR 晶体结构中还存在                        KS15。结合生物素的 KS15 能阻断 CRY 对 CLOCK-
        一个可与共激活因子结合的helix12结构 。T0901317、                    BMAL1 异二聚体的抑制作用，在激活部分钟控基因表
                                           [35]
        SR1001 及其多种衍生物被鉴定为 ROR 的可逆激动剂，                      达的同时可减弱细胞节律的振幅 。 Chun 等 对人乳
                                                                                                    [46]
                                                                                         [45]
        对免疫、代谢等方面疾病模型的小鼠具有治疗效果 ，但                           腺癌 MCF-7 细胞的研究发现，KS15 可上调凋亡基因和
                                                    [4]
        尚未有研究报道这些ROR可逆激动剂对生物钟功能的                            细胞周期调节因子（如 p53 和 Bax）的表达量，并表现出
        影响。                                                 对肿瘤细胞的抗增殖和促凋亡特性，但并不降低非癌细
            多种天然小分子化合物具有调节ROR的作用，其中                         胞 MCF-10A 的活性。对 KS15 的构效关系分析确定了
        新红豆素（Neoruscogenin）被鉴定为 ROR 激动剂，其与                  其抑制 CRY 的关键位点，但其与 CRY 相互作用的分子
        ROR结合可增强Bmal1和代谢基因的表达，对动脉粥样                         机制仍不清楚 。
                                                                        [45]
        硬化的治疗及脂糖代谢的改善具有潜在意义 。另一                             3.4  靶向CLOCK
                                                [36]
        种天然化合物诺比利丁（Nobiletin）在表型筛选实验中被                          CLOCK 是调控钟基因的转录-翻译反馈环路中重
        确定为ROR激动剂，具有增强节律振幅的作用，可使糖                           要的组成部分，其含量和活性显著影响生物钟的稳定性
        尿病或肥胖模型小鼠的钟基因（Bmal1、Npas2）和钟控基
                                                            和振幅强度 。靶向 CLOCK 的生物钟调控小分子化合
                                                                      [3]
        因（Ucp1、Atp5d）表达显著上调，起到维持小鼠血糖血脂
                                                            物详见表4。
                                [37]
        稳态、保护代谢功能等作用 。诺比利丁、新红豆素及
                                                            表4   靶向CLOCK的生物钟调控小分子化合物（部分）
        其代谢物质天然存在，无毒性，且具有良好的改善代谢
                                                             项目             CLK8
        的能力，是具有潜力的候选药物             [38－39] 。                 作用靶点           CLOCK
        3.3  靶向CRY的小分子化合物                                    结构式
            钟蛋白 CRY 是调控钟基因的核心环路负反馈途径
        中重要的组成部分，靶向CRY的生物钟调控小分子化合
        物见表3。
          表3   靶向CRY的生物钟调控小分子化合物（部分）
                                                             作用             CLOCK抑制剂
         项目        KL001                 KS15                表型影响           增强振幅
         作用靶点      CRY                   CRY                    对 CLOCK-BMAL1 异二聚体的晶体结构研究发
         结构式
                                                            现 ，这 两 种 关 键 钟 蛋 白 通 过 相 似 的 结 构 域（bHLH、
                                                            PAS-A、PAS-B）结合，形成 3 个蛋白质-蛋白质接口以完
                                                            成稳定的相互作用，这也为各种小分子化合物的结合提
                                                            供了可能。目前，CLK8是唯一鉴定出的靶向CLOCK的
         作用        CRY激活物                CRY抑制剂
         表型影响      延长周期                  减弱振幅               小分子化合物。分子对接研究发现，CLK8可与CLOCK
         应用领域      代谢障碍、癌症               癌症                 蛋白的 bHLH 和 PAS-A 结构域结合，从而减弱 CLOCK
            最先被发现的CRY调节物是KL001，它是一种含有                       和BMAL1的相互作用，并影响CLOCK蛋白的亚细胞定
        甲磺酰胺和呋喃结构的咔唑类化合物 。KL001的甲磺                          位，使其在细胞核内的含量降低；同时 CLK8 可减弱转
                                        [40]
        酰胺结构可与泛素化相关物质 F-box/LRR 重复蛋白 3                      录-翻译反馈环路中正反馈环路的作用，却不影响负反
        （FBXL3）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）竞争 CRY 中                      馈环路中CRY和PER的含量，导致生物节律振幅增强，
                                                [41]
        FAD口袋处的结合位点，抑制CRY泛素化降解 。在胶                          但其具体机制仍不清楚 。CLK8作为一种新型生物钟
                                                                                [47]
        ·894 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7                                    中国药房    2021年第32卷第7期
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