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protein were significantly decreased （P＜0.01）. Compared with model group，the escape latency was significantly shortened in
positive control group and TSG groups（P＜0.01）；the retention time of the original platform quadrant was significantly prolonged
（P＜0.01）；the times of crossing the platform was significantly increased（P＜0.01）；the number of Nissl bodies in cerebral cortex
and hippocampus was increased significantly，the staining was heavy；the relative expression of JNK protein was significantly
decreased（P＜0.05 or P＜0.01），the relative expressions of PP2B mRNA and protein were significantly increased（P＜0.01），
while the relative expression of JNK mRNA was significantly decreased in TSG high-dose group（P＜0.05）. CONCLUSIONS：TSG
can improve the learning and memory ability and neuronal damage of 3 × Tg-AD mice. The mechanism may be related to
down-regulating the transcription and expression of protein kinase JNK，up-regulating the transcription and expression of protein
phosphatase PP2B.
KEYWORDS Alzheimer’s disease；Stilbene glucoside；APP/PS1/Tau transgenic dementia mice；c-Jun N-terminal kinase；
Protein phosphortase 2B

阿尔茨海默病（AD）亦称老年性痴呆，是老年人群 司]；LightCycler96 型荧光定量-聚合酶链式反应（PCR）
常见的一种退行性神经疾病。随着中国老年人口数量 系统[罗氏诊断产品（上海）有限公司]；ME204E 型电子
的日益增多，AD 带给老年群体的各种精神问题不容忽 天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Tanon-
视。刘肇瑞等 开展的中国≥55岁人群归因于痴呆的精 5200 multi 型全自动化学发光图像分析仪（广州誉维生
[1]
神残疾描述性流行病学研究发现，残疾人群归因于 AD 物科技仪器有限公司）；SpactraMax i3x型多功能酶标仪
的精神残疾率较高，尤其是合并多重残疾者归因于 AD （美国Molecular Devices公司）；Neofuge15R型高速冷冻
的精神残疾率更高 。在中国，仅 60 岁以上老年人的 离心机（上海力康生物医疗科技控股有限公司）；BX53
[1]
AD患病率已达5％，而80岁以上老年人的AD患病率高 型正置荧光显微镜（日本Olmypus公司）。
[2]
达 20％ 。然而，目前可用于 AD 治疗的药物仅能缓解 1.2 药品与试剂
[3]
症状，且副作用明显，无法达到根治的目的 。因此，研 TSG提取物（成都克洛玛生物科技有限公司，批号：
发具有高效低毒的治疗AD的药物已成为医药科研工作 CHB180810，纯度：≥70％）；石杉碱甲片（辰欣药业股份
者关注的焦点。 有限公司，批号：191211202，规格：50 μg/片）；高效RIPA
二苯乙烯苷（化学名为 2，3，5，4′-四羟基-二苯乙 组织/细胞快速裂解液（批号：20190922）、尼氏染色液（批
烯-2-O-β-D-葡萄糖苷，简称 TSG）是何首乌提取物中的 号：20200320JH）均购自北京索莱宝科技有限公司；100×
主要药理活性成分。本课题组前期研究表明，TSG能通 蛋白酶抑制剂（美国 Med Chem Express 公司，批号：
过减少β-淀粉样蛋白（Aβ）的沉积和老年斑形成，改善 HY-K0010）；兔 抗 小 鼠 PP2B 多 克 隆 抗 体（批 号 ：
APP/PS1 双转基因 AD 小鼠的学习记忆能力 ，同黄蕊 00050052）、鼠 抗 小 鼠 JNK 多 克 隆 抗 体（ 批 号 ：
[4]
等 的研究结果一致，这提示 TSG 在 AD 的防治方面有 10010983）、兔抗小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）多
[5]
重要的研究价值，但尚需更多个模型从多角度加以证 克隆抗体（批号：00083125）、辣根过氧化物酶（HRP）标
实。现有研究表明，AD与过度磷酸化的Tau蛋白的关系 记山羊抗小鼠免疫球蛋白 G（IgG）二抗、HRP 标记山羊
紧密 [6-8] 。Tau蛋白的异常磷酸化可导致AD患者的认知 抗兔 IgG 二抗均购自美国 Proteintech Group 公司；鼠抗
障碍。可见，抑制和调控 Tau 蛋白的磷酸化可能是预防 小鼠β-肌动蛋白（β-actin）单克隆抗体（美国Invitrogen公
和治疗AD的关键。另有研究表明，c-Jun氨基末端激酶 司，批号：UD277186）；总RNA提取试剂盒（美国Axygen
（JNK）、钙调节神经磷酸酶（PP2B）参与了 Tau 蛋白的异 公司，批号：00920KD1）；10％聚丙烯酰胺（PAGE）凝胶
常磷酸化 [9-10] ，因此JNK、PP2B的表达变化可能与AD的 快速制备试剂盒（批号：02431400）、Omini-ECL 超灵敏
TM
发病机制有关。鉴于此，本课题组选择高表达 Tau 基因 感化学发光检测试剂盒（批号：02391063）、二喹啉甲酸
突变的APP/PS1/Tau三转基因痴呆（3×Tg-AD）小鼠为研 （BCA）蛋白定量试剂盒（批号：013B1050）、5×蛋白快速
究对象，研究 TSG 对其 JNK、PP2B 表达的影响，探索该 封闭液（批号：0141189）均购自上海雅酶生物科技有限
药抗 AD 的可能机制，进而为其临床应用提供一定的理 公司；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
论支持。 1.3 动物
1 材料 本研究所使用的实验动物有APP/PS1/Tau 3×Tg-AD
1.1 仪器 和与其有相近遗传背景的 C57BL/6J 两种小鼠品系，均
DigBehv-MG 型 Morris 水迷宫（上海吉量软件科技 为SPF级、雄性。3×Tg-AD小鼠购自美国Jackson Labo-
有限公司）；14050237999型半自动轮转式切片机、Arca- ratory 公司（健康证书编号：1911A18008），体质量为
dia（H+C）型包埋机[徕卡显微系统（上海）贸易有限公 （25.02±0.20）g，共 45 只，6 周龄；C57BL/6J 小鼠购自长

·2340 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 19 中国药房 2020年第31卷第19期