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2 方法 r/min离心15 min,制备PPP。
2.1 水蛭的炮制 2.5.1 PT的测定 取50 µL的PPP,37 ℃温育3 min,加
[1]
2.1.1 吊干品 参考文献方法 ,取100 g水蛭药材去除 入 PT 试剂 100 µL,混匀,静置,记录血浆凝固时间(即
杂质(净制),切段,粉碎,过五号筛,得到水蛭吊干品。 PT)。
2.1.2 滑石粉烫制品 参考文献方法 ,将50 g滑石粉 2.5.2 APTT 的测定 取 PPP、APTT 试剂各 50 µL,混
[12]
置于锅内,武火加热至灵活状态后,加入水蛭吊干品 匀,37 ℃温育3 min,加入氯化钙溶液50 µL,记录血浆凝
100 g,不断翻动,烫至微鼓起时取出,筛去滑石粉,放凉, 固时间(即APTT)。
粉碎,过五号筛,得到水蛭滑石粉烫制品。 2.5.3 TT 的测定 取 100 µL 的 PPP,37 ℃温育 3 min,
[13]
2.1.3 酒润麸制品 参考文献方法 ,取 100 g 水蛭吊 加入TT试剂100 µL,混匀,静置,记录血浆凝固时间(即
干品,切段,用 10 g 黄酒拌匀,闷润至透心;用中火将锅 TT)。
烧热,再将10 g麦麸皮均匀撒入锅内,待冒烟时,倒入酒 2.6 统计学方法
润水蛭段,拌炒至水蛭表面呈黄色,有特殊气味逸出时, 采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。数据以
迅速取出,筛出焦麦麸,放凉,粉碎,过五号筛,得到水蛭
x±s 表示,多组样本间比较采用单因素方差分析,两两
酒润麸制品。 比较采用 Dunnett-t 法。P<0.05 表示差异有统计学
2.2 分组、造模与给药
意义。
[14]
根据文献方法 ,所有大鼠适应性喂养7 d后,将其
3 结果
随机分为12组,分别为空白组,模型组,阿司匹林组(阳
3.1 全血黏度和血浆黏度
性对照),水蛭吊干品低、中、高剂量组,水蛭滑石粉烫制
与空白组比较,模型组大鼠低、中、高切变率下的全
品低、中、高剂量组,水蛭酒润麸制品低、中、高剂量组,
血黏度和血浆黏度均显著升高(P<0.01)。与模型组比
每组6只。除空白组大鼠皮下注射等体积生理盐水外,
较,阿司匹林组和水蛭吊干品、滑石粉烫制品、酒润麸制
其余各组大鼠每日2次皮下注射盐酸肾上腺素0.9 mg/kg
品高剂量组大鼠低、中、高切变率下的全血黏度和血浆
(溶剂为生理盐水,每次间隔 4 h),并在第 1 次皮下注射
黏度以及水蛭滑石粉烫制品低剂量组和水蛭酒润麸制
2 h 后,将大鼠置于冰水浴中 4 min。重复上述操作 15 d
品中剂量组大鼠低、中切变率下的全血黏度均显著降低
以复制急性血瘀模型 [14-16] 。从造模的第 8 天起,根据文
(P<0.05 或 P<0.01)。各组大鼠全血黏度和血浆黏度
[8,9]
献方法 设置给药剂量,水蛭炮制品各剂量组大鼠每日在
的检测结果见表1。
第2次注射盐酸肾上腺素1 h后分别按0.35、1.4、3.5 g/kg
表1 各组大鼠全血黏度和血浆黏度的检测结果(x±±s,
(以生药量计,溶剂为生理盐水)灌胃相应炮制品,阿司
n=6,mPa·s)
匹林组大鼠同时间段内按0.2 g/kg(溶剂为生理盐水)灌
胃阿司匹林,空白组和模型组大鼠同时间段内灌胃等体 Tab 1 Determination results of whole blood vi-
积生理盐水,每日1次,连续8 d。 scosity and plasma viscosity of rats in each
2.3 血样采集 group(x±±s,n=6,mPa·s)
末次给药第 2 天,所有大鼠均禁食不禁水 12 h,以 全血黏度
组别 -1 -1 -1 血浆黏度
10%水合氯醛麻醉后,于腹主动脉取血约 8 mL,其中 4 10 s 60 s 150 s
空白组 11.65±0.52 6.35±0.03 4.77±0.24 1.06±0.03
mL全血分装于肝素抗凝管中,其余4 mL全血加入3.2% 模型组 16.90±0.07 ** 8.69±0.08 ** 6.55±0.12 ** 1.23±0.06 **
枸橼酸钠(血液与抗凝剂体积比为9∶1)抗凝。 阿司匹林组 14.76±0.11 ## 7.06±0.07 ## 5.22±0.14 ## 1.09±0.03 ##
水蛭吊干品低剂量组 16.74±0.19 8.59±0.05 6.46±0.09 1.21±0.05
2.4 血液流变学指标的检测
水蛭吊干品中剂量组 16.68±0.07 8.55±0.13 6.32±0.05 # 1.19±0.03
打开血液流变仪,预温 15 min 至 37 ℃。取“2.3”项 水蛭吊干品高剂量组 15.48±0.09 ## 7.13±0.09 ## 5.57±0.10 ## 1.12±0.04 ##
水蛭滑石粉烫制品低剂量组 16.64±0.08 # 8.54±0.05 # 6.40±0.01 1.19±0.02
下肝素抗凝管中的全血,混匀后取适量测定在低、中、高
水蛭滑石粉烫制品中剂量组 16.76±0.07 8.60±0.07 6.37±0.02 1.18±0.04
-1
切变率(10、60、150 s )下的全血黏度,以及红细胞变 水蛭滑石粉烫制品高剂量组 15.47±0.06 ## 8.53±0.14 # 5.42±0.11 ## 1.15±0.05 #
形指数、红细胞聚集指数、红细胞压积;剩余全血经3 500 水蛭酒润麸制品低剂量组 16.77±0.09 8.60±0.06 6.36±0.05 1.21±0.05
水蛭酒润麸制品中剂量组 15.99±0.25 ## 7.41±0.08 ## 6.36±0.05 1.17±0.02
r/min离心 15 min,制备贫血小板血浆(PPP),测定血浆 水蛭酒润麸制品高剂量组 15.96±0.28 ## 7.21±0.04 ## 5.41±0.08 ## 1.11±0.04 ##
黏度。 注:与空白组比较, P<0.01;与模型组比较,P<0.05,P<0.01
##
#
**
2.5 凝血指标的检测 Note:vs. blank group, * * P<0.01;vs. model group, P<0.05,
#
取“2.3”项下经3.2%枸橼酸钠抗凝的全血,以3 500 ## P<0.01
·1986 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 16 中国药房 2020年第31卷第16期