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high concentration group （P＜0.05）. Compared with matrine medium concentration group，all above indexes were improved
        significantly in matrine high concentration group（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Matrine can suppress the proliferation and collagen
        synthesis of CFSC-8B cells activated by acetaldehyde，with a centain concentrlation dependence，the mechanism of which may be
        associated with regulating the conduction of TGFβ/Smad signal pathway.
        KEYWORDS     Matrine；Hepatic stellate cells；Proliferation；Collagen synthesis；TGF-β1/Smad pathway；Mechanism


            肝纤维化是肝硬化的必经阶段，也是肝细胞癌的前                          活力检测试剂盒、肝组织羟脯氨酸（Hyp）检测试剂盒以
          [1]
        兆 。在遗传性或非遗传性损伤因素的慢性刺激下，肝                            及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂盒（南
        脏内处于静止期的肝星状细胞被激活，转化成为肌成纤                            京建成生物工程研究所，批号：20190401、20181205、
        维样细胞后，分泌多种促炎因子/促纤维因子，合成α-平                          20181210、20181210）；细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试
        滑肌肌动蛋白（α-SMA），并产生大量以Ⅰ型胶原蛋白                          剂盒（北京碧云天生物技术公司，批号：P0028-1）；RNA
        （Col-Ⅰ）、Ⅲ型胶原蛋白（Col-Ⅲ）为主的肝内细胞外基                      抽提试剂盒（美国Ambion公司，批号：47323）；超敏发光
        质（ECM）成分，ECM在肝脏内过度沉积，继而造成肝纤                        （ECL）检测试剂盒[赛默飞世尔科技（中国）有限公司，批
            [2]
        维化 。引起肝纤维化的因素包括肝炎病毒、血吸虫病、                           号 ：RG239143]；兔 抗 鼠 α-SMA 多 克 隆 抗 体 、兔 抗 鼠
                                            [3]
        酒精、药物、胆汁淤积及自身代谢疾病等 。研究显示，                           TGF-β1Ⅰ型受体（TβR-Ⅰ）多克隆抗体、兔抗鼠TGF-β1多
                                                      [4]
        由酒精性肝损伤造成的肝纤维化的发生率逐年升高 。                            克隆抗体、兔抗鼠 Smad4 多克隆抗体、兔抗鼠磷酸甘油
        因此，寻找有效防治酒精性肝纤维化的药物，以防止其                            醛脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体（美国 CST 公司）；兔抗
        发展成肝硬化甚至肝癌，具有重要的临床意义。                               鼠TGF-β1Ⅱ型受体（TβR-Ⅱ）多克隆抗体、兔抗鼠Smad7
            中药苦参为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）            多克隆抗体（美国 Santa Cruz 公司）；兔抗鼠 Smad3 多克
        的干燥根，具有抗菌、抗病毒、抗炎、免疫调节、抗肿瘤、                          隆抗体（美国Sigma公司）；生物素标记的山羊抗兔免疫
        保肝等多种药理作用          [5-6] 。苦参碱是苦参中的有效成分              球蛋白 G（IgG）二抗（北京康为世纪生物科技有限公
        之一，在临床上已被应用于病毒性肝炎的治疗                     [7-8] ，但其  司）；α-SMA、TGF-β 1、TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ、Smad3、Smad4、
        对酒精性肝损伤造成的肝纤维化是否存在逆转作用尚                             Smad7引物均由上海生工生物工程有限公司合成；其余
        未见报道。转化生长因子β 1 （TGF-β 1）/Smad 信号通路                  试剂均为分析纯，水为超纯水。
        在肝胶原合成与肝纤维化发展过程中起着关键性的作                             1.3  细胞
          [9]
        用 。因此，本研究以乙醛活化的大鼠肝星状细胞 CF-                              大鼠肝星状细胞 CFSC-8B 购于赛百慷（上海）生物
        SC-8B为模型，探讨苦参碱对活化后肝星状细胞增殖和                          技术股份有限公司。
        胶原合成的影响，并从 TGF-β 1/Smad 信号通路着手探究                    2 方法
        其可能的作用机制，为苦参碱的进一步临床应用提供实                            2.1  细胞培养
        验依据。                                                    将细胞接种于含 10％小牛血清的 DMEM 培养基
        1 材料                                                中，置于37 ℃、5％ CO2的培养箱（下同）中培养24 h后，
        1.1  仪器                                             更换为不含血清的 DMEM 培养基继续培养 24 h。取生
            CKX41型倒置显微镜（日本Olympus公司）；3111型                  长状态良好并处于对数生长期的细胞，加胰酶消化后，
        二氧化碳培养箱（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）；            以 1 000 r/min 离心 3 min，收集细胞并制成密度为 1×10         5
        UV-2550 型紫外分光光度计（日本 Shimadzu 公司）；                   个/mL的细胞悬液。
        XPE504型分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）；ELX800              2.2 苦参碱对细胞增殖的影响考察
                                                                                                    4
        型全自动酶标仪（美国 Bio-Tek 公司）；Countess C10227                  采用CCK-8法检测。取细胞悬液，按1×10 个/孔的
        型细胞计数器（美国 Invitrogen 公司）；5417R 型离心机                 密度接种于 96 孔板中。将细胞分为空白对照组、模型
        （德国Eppendorf公司）；Stratagene Mx3005P 型实时荧光            组、阳性对照组（2.5 μmol/L 秋水仙碱，根据预试验结果
        定量-聚合酶链式反应（RT-PCR）仪（美国Agilent公司）；                   设置浓度）和苦参碱低、中、高浓度组（30、60、120 μmol/L，
        SmartChemi Ⅱ型一体式化学发光成像仪（北京赛智创业                      根据预试验结果设置浓度），每组设置3个复孔。将以上
        科技有限公司）；HL-2000 型分子杂交箱（美国 UVP 公                     18个孔记为试验孔，并另设对照孔和空白孔。培养24 h
        司）；JY-ZY2型转移电泳槽、JY-CZ1型单垂直电泳槽（北                     后，除空白对照组外，其余各组细胞均加入 200 μmol/L
        京君意东方电泳设备有限公司）。                                     乙醛溶液诱导细胞活化 ；同时，各给药组细胞加入相
                                                                                 [10]
        1.2  药品与试剂                                          应浓度的药液，空白对照组和模型组细胞加入等体积空
            苦参碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：                          白培养液。继续培养24 h后，更换培养基，加入CCK-8试
        140905，纯度：≥98％）；秋水仙碱片（西双版纳药业有限                      剂（10 μL/孔），继续培养 2 h。采用酶标仪于 450 nm 波
        责任公司，批号：H53021369，规格：0.5 mg）；CCK-8细胞                长下测定各孔吸光度（A），根据公式计算细胞增殖率：细


        ·1354  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11                                中国药房    2020年第31卷第11期
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