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in cells in 25 µg/mL CP1-2-1 group and mRNA expressions of TLR4，NF-κB，TNF-α，IL-6 in cells in 50，100 µg/mL CP1-2-1
group were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）；mRNA expressionsof IL-6 in cells in 25 µg/mL CP3-1-1 group，mRNA
expressions of NF-κB，TNF-α，IL-6 in cells in 50 µg/mL CP3-1-1 group and mRNA expressions of TLR4，NF-κB，TNF-α，IL-6
in cells in 100 µg/mL CP3-1-1 group were significantly decreased（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：CP，CP 1-2-1 and CP
3-1-1 all have certain anti-inflammatory activities. The mechanism may be related to inhibiting the generation and releasing of
inflammatory cytokines such as TNF-α，IL-6 by inhibiting the activation of TLR4/NF-κB pathway.
KEYWORDS Codonopsis Radix polysaccharides；Crude polysaccharide；Polysaccharide component；Anti-inflammatory activity；
Mechanism

多糖是继核酸和蛋白质之后的第三大类生物大分 果糖（批号：B21896）、半乳糖醛酸（批号：YY11147）等单
子。近年，随着糖组学、糖生物学的飞速发展，已有越来 糖标准品均购自上海源叶生物科技有限公司，纯度均为
越多的传统中药多糖（如枸杞多糖、当归多糖、黄芪多 98％；脂多糖（LPS，美国Sigma公司，批号：L2630）；一氧
糖、灵芝多糖等）被证实具有诸如抗氧化、调节免疫、抗 化氮（NO）检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司，
[1]
TM
肿瘤以及降血糖等多种生物活性 。党参为桔梗科植物 批号：20170211）；Azfresh 总 RNA 小量/微量提取试剂
党 参 [Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.]、素 花 党 参 盒（批号：A06110014）、AZpolaris TM cDNA Synthesis 提取
[Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta（Nannf.）L.T. 试剂盒（批号：A0610105）、AZpolaris 实时荧光定量-聚
TM
Shen]或川党参（Codonopsis tangshen Oliv.）的干燥根，是 合酶链式反应（qPCR）试剂盒 MasterMix（SYBR Green）
我国常用的传统中药，具有健脾益肺、补中益气以及调 （批号：A1127110）均购自瑞典Azanno公司；白细胞介素
理胃肠运动的效用 [2-3] 。目前，已有许多研究从党参中提 6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、核因子-κB（NF-κB）
取到党参多糖，并证实了其具有多种生物活性，其中就 mRNA 引物均由上海 Invitrogen 公司合成及检验；二甲
包括了抗炎活性 [4-6] 。本课题组前期研究发现，党参粗多 基亚砜（DMSO）等试剂均为市售分析纯，水为超纯水。
[7]
糖对溃疡性结肠炎模型大鼠有防治作用 ，然而其中具 1.3 细胞
有抗炎活性的有效组分并不明确。鉴于此，本研究拟对 小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7购于武汉普诺赛生
党参粗多糖进行进一步的分离纯化，筛选其中具有抗炎 命科技有限公司。
作用的有效组分，并探索其抗炎机制，以期为明确党参 2 方法与结果
多糖中的抗炎活性物质提供参考。 2.1 党参多糖不同组分的分离纯化
1 材料 按照本课题组前期报道方法 进行党参粗多糖的制
[8]
1.1 仪器 备：取500 g党参药材，采用水提醇沉法得棕黄色粉末状
UV-2550型紫外分光光度计（日本Shimadzu公司）； 粗多糖（记为CP）46.6 g，得率为9.3％。CP的分离纯化：
2F1-I 型多功能紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）； 将CP溶于水中，制成20 mg/mL的溶液。取200 mL上述
1100LC/MSD Trap 型二维液相色谱仪（美国 Agilent 公 溶液，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤后，上 DEAE Sepharose
司）；RE-2010 型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）； Fast Flow凝胶柱（20 cm×2.6 cm），以2 mL/min的流速依
FDU-2110型冷冻干燥机（日本Eyela东京理化器械株式 次用水和 0.1、0.25 mol/L 的氯化钠溶液进行洗脱，按 10
会社）；MCO-230AICU-VL-PC型CO2培养箱（日本Pana- mL/管收集洗脱液，采用苯酚-硫酸法隔管检测，直至紫
sonic公司）；iMark型酶标仪（美国Bio-Rad公司）。 外分光光度计测定无多糖吸收峰为止（最后用0.5 mol/L
1.2 药品与试剂 氯化钠溶液冲柱）。将收集得到的3种溶液洗脱部分透
党参药材购自九州通医药集团股份有限公司（产 析冻干，得淡黄色粉末，分别命名为CP1、CP2、CP3，得率
地：湖北恩施板桥镇，批号：181103，规格：500 g），经湖北 分别为 54.9％、9.9％、22.8％。取 100 mg 各洗脱部分粉
中医药大学药学院陈科力教授鉴定为桔梗科植物川党 末，分别加 4 mL 相应洗脱液溶解后，继续上 Sephade-
参（C. tangshen Oliv.）的干燥根茎；DEAE Sepharose Fast xG-150葡聚糖凝胶柱（90 cm×2.0 cm）进行纯化，然后以
Flow凝胶、Sephadex G-150葡聚糖凝胶、G-100葡聚糖凝 0.5 mL/min 的流速分别用相应洗脱液进行洗脱，按 5
胶（美国通用电气医疗生物科学有限公司，规格：500 g）； mL/管收集洗脱液，将所有洗脱剂的洗脱组分分别透析
分子量分别为 2 000、500、70、40、10、3 kDa 的葡聚糖标 冻干，分别命名为 CP1-1（得率为 5.7％）、CP1-2（得率为
准品（批号：S14118、S14116、S14112、S14110、S14107、 36.1％）、CP2-1（得率为 1.5％）、CP2-2（得率为 1.7％）、
S14101）以及葡萄糖（批号：B21882）、甘露糖（批号： CP3-1（得率为 14.2％）。取其中得率较高的 CP1-2、
B21895）、半乳糖（批号：JG155275）、阿拉伯糖（批号： CP3-1 各 50 mg，分别加 2 mL 水、0.25 mol/L 氯化钠溶液
B25848）、鼠李糖（批号：B21931）、木糖（批号：B21155）、 溶解后，上 SephadexG-100 柱（70 cm×1.5 cm）进行分离

中国药房 2020年第31卷第11期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 ·1349 ·