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（分别用对应溶剂进行洗脱，流速为 0.25 mL/min，按 4
8 000
mL/管进行收集），最终得2个多糖组分，透析冻干后，分
6 000
别命名为CP1-2-1、CP3-1-1，得率分别为28.9％、9.3％。 nRIU 4 000
2.2 党参多糖的表征 2 000
0
2.2.1 党参多糖的糖含量和糖醛酸含量 采用苯酚-硫 0 2 4 6 8 10 12 14 16
酸法 测定 CP 中糖含量：将 CP 制备成质量浓度为 0.2 t，min
[9]
A. CP1-2-1
mg/mL 的水溶液，以葡萄糖为对照品，采用紫外可见分
光 光 度 计 进 行 测 定 。 采 用 间 羟 基 联 苯 法 [10] 测 定 2 500
2 000
CP1-2-1、CP3-1-1 中糖醛酸含量：将样品制成 1 mg/mL nRIU 1 500
的水溶液，以葡萄糖醛酸为对照品，采用紫外可见分光 1 000
500
光度计进行测定。结果显示，CP的糖含量高达（92.20± 0
0.73）％，表明所提取的产物几乎均为多糖，可以用于后 0 2 4 6 8 10 12 14 16
t，min
续试验。组分 CP1-2-1 中几乎不含有糖醛酸（含量接近 B. CP3-1-1
0），是一种中性多糖；而组分CP3-1-1中糖醛酸的含量高 图1 组分CP1-2-1和CP3-1-1的HPGPC色谱图
达（76.3±0.71）％，表明CP3-1-1可能是一种富含糖醛酸 Fig 1 HPGPC chromatograms of component CP1-2-1
的酸性多糖。 and CP3-1-1
2.2.2 组分CP1-2-1、CP3-1-1的相对分子量 采用高效
见光、紫外灯下（波长范围为260～280 nm）观察，详见图
凝 胶 渗 透 色 谱 法（HPGPC） 进 行 测 定 。 色 谱 柱 为
[11]
2。结果显示，组分 CP1-2-1 中只含有果糖，是一种单一
TSK-GEL，检测器为示差折光检测器，进样量为 50 μL，
组成的多糖；而组分 CP3-1-1 则由阿拉伯糖、鼠李糖、半
流动相为水，流速为0.95 mL/min，柱温为40 ℃。取不同
乳糖以及半乳糖醛酸等单糖组成，是一种酸性杂多糖。
分子量（2 000、500、70、40、10、3 kDa）的葡聚糖标准品，
加水制成质量浓度均为1 mg/mL的标准溶液，按上述色 鼠李糖
谱条件进行测定，记录色谱图。运用 EZ Chrom Elite 阿拉伯糖
果糖
Compact 软件对测得的洗脱体积（Vp ）与标准品分子量 半乳糖
（Mp ）进行拟合，得到标准曲线方程为 lgMp＝－0.6×
3
10 －10 Vp +1.365×10 Vp －0.108 9Vp+295.5（R＝0.999 1）。
2
－5
然后，取组分CP1-2-1、CP3-1-1适量，用水制备成质量浓 半乳糖醛酸
度为 1 mg/mL 的样品溶液，按上述色谱条件进样测定， CP1-2-1 CP3-1-1 CP1-2-1 CP3-1-1
记 录 色 谱 图 ，详 见 图 1。 结 果 显 示 ，组 分 CP1-2-1、
可见光 紫外光
CP3-1-1 的色谱图中均显示为单一对称峰，说明这 2 种
图2 组分CP1-2-1和CP3-1-1的TLC图
组分是均一多糖。测得两种组分的洗脱体积分别为
Fig 2 TLC chromatograms of component CP1-2-1
8 514.21、7 901.32 mL，根据标准曲线方程计算得组分
and CP3-1-1
CP1-2-1、CP3-1-1的相对分子量分别为25.8、49.5 kDa。
2.2.3 组分 CP1-2-1 和 CP3-1-1 的单糖组成 采用完全 2.3 3种多糖的抗炎活性评价及机制研究
[12]
酸水解法联合薄层色谱（TLC）法 进行分析。取各单糖 2.3.1 3种多糖的细胞毒性考察 取处于对数生长期的
3
（葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、果 RAW264.7细胞，以5×10 个/孔接种于96孔板中（取3块
糖、半乳糖醛酸）对照品适量，用水制备成质量浓度均为 板，分别考察CP、CP1-2-1、CP3-1-1这3种多糖的细胞毒
10 mg/mL 的单糖标准溶液，备用。将组分 CP1-2-1 在 性），每孔100 μL。将细胞分为空白组、对照组和不同质
0.2 mol/L硫酸、60 ℃条件下水解40 min，将组分CP3-1-1 量浓度多糖组，每组设6个复孔。将细胞置于37 ℃、5％
在 2 mol/L 盐酸、110 ℃条件下水解 2 h，待完全酸水解 CO2培养箱中，待细胞培养24 h贴壁良好后，空白组加入
后，取产物适量分别加水溶解，制成质量浓度均为 10 培养基，对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS），多糖组分别加
mg/mL 的样品溶液。分别取单糖标准溶液和样品溶液 入不同质量浓度的多糖 PBS 溶液（0.01、0.1、1、10、100
点样于薄层纤维素板（20 cm×10 cm）上，点样量均为 10 μg/mL），每孔 200 μL。分别将各组细胞置于 37 ℃、5％
μL。以正丁醇-乙酸乙酯-异丙醇-甲酸-水-吡啶（3.5 ∶ 10 ∶ CO2条件下继续培养 24 、48 h 后，吸弃培养基，加 20 μL
6 ∶ 3.5 ∶ 3 ∶ 3，V/V/V/V/V/V）为展开剂，展开。以苯胺-邻苯 MTT溶液，在37 ℃下继续培养4 h，吸弃培养基；每孔中
二甲酸为显色剂进行显色（110 ℃、10 min）后，分别在可 加入150 μL的DMSO溶液，摇匀，采用酶标仪在490 nm

·1350 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 11 中国药房 2020年第31卷第11期