Page 90 - 2020年2月第31卷第3期

day after modeling were decreased significantly in single medication group（P＜0.05），while serum calcium level，mRNA and
protein expression of BDNF in hippocampus were decreased significantly（P＜0.05）. Compared with single medication group，the
latency，frequency and duration of spontaneous recurrent epilepsy and the times of abnormal brain wave on the 28th and 36th day
after modeling were increased significantly in agonist combination group （P＜0.05），while serum calcium level，mRNA and
protein expressions of BDNF in hippocampus were increased significantly（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Mulberry anthocyanin-3-
glucoside has a good protection effect on epilepsy model mice，the mechanism of which may be associated with inhibiting the
activation of hippocampal BDNF/TrkB pathway.
KEYWORDS Mulberry anthocyanin-3-glucoside；Epilepsy；Brain derived neurotrophic factor；Tyrosine kinase B；Mechanism；
Mice

癫痫为儿科常见病，是由于脑神经元反复异常放电 动剂 LM22B-10（美国 Selleck 公司，货号：6037，纯度：
所致，临床上多表现为惊厥、阵挛或窒息发作，对患儿的 98.81％）；氯化锂（上海晶抗生物工程有限公司，货号：
生活质量造成了较大影响，严重者可危及生命 [1-2] 。目 7447-41-8）；氢溴酸东莨菪碱注射液（上海禾丰制药有限
前，癫痫主要通过药物进行治疗，常用的药物有丙戊酸 公司，批号：H31021519，规格：0.3 g/mL）；盐酸匹罗卡品
[3]
钠、奥卡西平等 。虽然目前临床可使用的抗癫痫药物 （货号：CAT 54-71-7，规格：200 g）、甲基百里香酚蓝
较多，但其治疗效果却不尽如人意，且药物治疗引起的 （MTB）比色法试剂盒（货号：CAT 1945-77-3）均购自美
[4]
副作用给患儿及其家属带来了不少困扰 。癫痫的发病 国 Sigma 公司；兔源 BDNF 抗体（货号：ab108389）、鼠源
机制较复杂，尚未完全阐明。据报道，脑源性神经营养 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（货号：ab22555）、
因子（Brain derived neurotrophic factor，BDNF）/酪氨酸 辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白G
激酶受体B（Tyrosine kinase B，TrkB）通路与癫痫的发病 （IgG）二抗（货号：ab97051）、HRP 标记的山羊抗兔 IgG
[5]
具有一定的相关性 。 二抗（货号：ab6789）均购自英国 Abcam 公司；RNA 提取
花青素是自然界中一类广泛存在于植物中的水溶 试剂盒（美国 Invitrogen 公司，批号：15589218）；引物均
性天然色素，目前用于提取花青素的主要原料有蓝莓、 由北京擎科生物有限公司合成；其余试剂均为分析纯，
[6]
桑椹、玉米等 。桑椹为桑科植物桑树（Morus alba Linn.） 水为蒸馏水。
的成熟果穗，具有抗氧化、降血糖、抗衰老等多种生物活 1.3 动物
性，是常见的药食同源的作物之一，从桑椹中提取的花 C57BL/6 小鼠 120 只，雄性，体质量 25～30 g，由河
青素具有含量高、性质较稳定、受光照和温度影响较小 北医科大学动物中心提供，实验动物使用许可证号：
等优点，其主要成分为花青素-3-葡萄糖苷 。研究发现， SYXK（冀）2014-0198。小鼠饲养环境通风良好，光照
[7]
[6]
花青素对癫痫模型小鼠细胞凋亡具有抑制作用 ；花青 周期为 12 h，环境温度为 25 ℃，湿度为 50％，饲养期间
素-3-葡萄糖苷也具有抗氧化、清除自由基、抗炎和抗肿 自由摄食、饮水。
瘤等作用 。作为花青素中主要成分，关于其是否具有 2 方法
[8]
抗癫痫作用以及其作用机制的报道较少。鉴于此，本 2.1 桑椹花青素-3-葡萄糖苷的提取
研究以桑椹花青素中主要成分花青素-3-葡萄糖苷为研 按文献方法 提取桑椹花青素-3-葡萄糖苷。将30 g
[9]
究对象，考察其对癫痫模型小鼠的保护作用，并基于 桑椹冷冻干燥后粉碎（30～80 目），以 0.1％盐酸-乙醇
BDNF/TrkB通路考察其作用机制，为该化合物的开发利 （40 ∶ 60，V/V）为提取溶剂、固液比 1 ∶ 20（g/mL）、浸提温
用提供实验参考。 度50 ℃、浸提时间1.5 h浸提2次，合并2次提取液，真空
1 材料 抽滤并浓缩得到粗浸膏（得率为 11％）。使用 Agilent
1.1 仪器 LC 1200 型高效液相色谱仪精制纯化花青素-3-葡萄糖
LC1200 型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司）； 苷，制备色谱柱为 YMC Hydrosphere C18 （150 mm×4.6
J2-21M 型高速低温离心机、Mc pro 384 型实时荧光定 mm，5 μm），纯化条件为 0.04％三氟乙酸（A）-乙腈（B）
量-聚合酶链式反应（PCR）仪（德国 Eppendorf 公司）； （95∶5，V/V），纯化时间为0.5 h，流速为1 mL/min，检测波
GE AI600型超灵敏多功能生物分子成像仪（美国Amer- 长为 254 nm。最终制备得到纯度＞99.5％的花青素-3-
sham Imager 公司）；B-H-300A 型动物行为学研究试验 葡萄糖苷样品。用生理盐水将花青素-3-葡萄糖苷制成
仪（北京北广精仪仪器有限公司）。 一定浓度的贮备液，高压灭菌后于－20 ℃冰箱中保存，
1.2 药品与试剂 备用。
桑椹购自河北农沃绿农业科技有限公司（批号： 2.2 分组、造模与给药
180213），由四川农业大学园艺学院赖云松副研究员鉴 小鼠适应性饲养1周后随机分为正常组、模型组、单
定为桑科植物桑树（M. alba Linn.）的成熟果穗；TrkB 激 药组（桑椹花青素-3-葡萄糖苷）和激动剂联用组（桑椹花

·336 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 3 中国药房 2020年第31卷第3期