Page 89 - 2019年10月第30卷第19期
P. 89

血化瘀药味组：包括黄芪、人参、麦冬、五味子、何首乌、                          2.4.1  神经功能评分       待大鼠清醒后，参照Bederson评
        当归、赤芍、毛冬青、全蝎、天麻、胆南星、猪牙皂、冰片、                         分方法 对各组大鼠的神经功能进行评分。评分标准
                                                                  [11]
        羌活、肉桂、地龙、僵蚕17味药，依据芪蛭通络胶囊制备                          如下：无神经损伤症状，0 分；悬尾试验中不能完全伸展
        工艺制备后，用 0.5％CMC-Na 溶液制备成质量浓度为                       对侧前爪，1分；前肢抵抗对侧推力能力下降，2分；自由
        38.9 g/L 的溶液。（3）芪蛭通络胶囊成品组：取成品芪蛭                     行走时向对侧转圈，3 分。得分越高表明神经功能受损
        通络胶囊，用 0.5％CMC-Na 溶液制备成质量浓度为 50                     程度越高。
        g/L的溶液。                                             2.4.2  脑梗死率测定       手术结束后大鼠断头取脑，去除
        2.2 分组与给药                                           嗅球、小脑和低位脑干，将取出的鼠脑用 4 ℃生理盐水
            将60只SD大鼠适应性饲养1周后随机分为5组，即                        冲洗后放在脑模上，连同脑模一起放入－20 ℃冰箱中冷
        假手术组[灌胃等量 0.5％CMC-Na 溶液]、模型组（0.5％                   冻。20 min 后取出鼠脑及脑模，用刀片连续冠状切片
        CMC-Na 溶液）、芪蛭通络胶囊活血化瘀药味组[0.253                     （约2 mm），将脑切片置于2％TTC染液中，于37 ℃烘箱
        g/（kg·d）]、芪 蛭 通 络 胶 囊 缺 活 血 化 瘀 药 味 组 [0.389        中避光温育15 min，染色后，正常组织呈现红色，梗死组
        g/（kg·d）]和、芪蛭通络胶囊成品组[0.500 g/（kg·d）]，每              织呈现白色。将脑片放在深蓝色的背景上，数码相机拍
        组12只，其中6只用于脑梗死率的测定，6只用于实验室                          照，照片用 Image Pro Plus 6.0 软件处理分析，计算大鼠
        指标的检测。药物组大鼠灌胃剂量均根据该方的组成                             脑梗死率：脑梗死率（％）＝Σ梗死面积/Σ全脑片面积×
        换算的等效剂量，每天灌胃给药1次，连续给药14 d。末                         100％。
        次给药2 h后，复制脑缺血再灌注损伤大鼠模型。                             2.4.3  脑组织中 NO、LDH、MDA、SOD 和炎症因子 IL-
        2.3  造模                                             1β、TNF-α含量的测定        大鼠缺血2 h再灌注24 h后，适
            参照文献方法       [9-10] 复制脑缺血再灌注损伤大鼠模               量乌拉坦麻醉，断头取脑，称定全脑的质量，用4 ℃生理
        型。术前禁食不禁水12 h，适量戊巴比妥钠溶液腹腔注                          盐水冲洗后，将全脑放入匀浆管中，加入全脑质量9倍体
        射麻醉后，将大鼠固定于鼠板上，剃除颈部毛，酒精消毒                           积的4 ℃生理盐水进行匀浆，制成10％的组织匀浆。将
        颈部皮肤，颈部正中作约 2.5 cm 的切口，使大鼠左侧颈                       组织匀浆在4 ℃下以3 000 r/min离心20 min，取上清液，
        动脉三角暴露，然后采用钝性分离法逐层分离组织，找                            备用。按照相应试剂盒说明操作，分别对脑组织匀浆中
        出左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉                         NO、LDH、MDA、SOD、IL-1β和TNF-α的含量进行测定。
        （ICA）。在 CCA 下插入两根长度约 10 cm 的缝合线，在                   2.5  统计学方法
        ECA 和 ICA 下分别插入一根长度约 10 cm 的缝合线备                        采用SPSS 22.0统计软件进行数据处理。计量资料
        用。分别结扎 CCA 和 ECA 下一根缝合线（注意不要结                       以x±s表示，先进行方差齐性检验，若方差齐性，组间比
        扎到白色的迷走神经），用动脉夹封闭ICA，在CCA近心                         较采用LSD-t检验；若方差不齐性，则组间比较采用秩和
        端用眼科剪剪开一小口（注意不要剪断 CCA）。用手拉                          检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。
        扯CCA下未结扎的缝合线，通过导线针将鱼线从缺口内                           3 结果
        插入（体质量为260～280 g的大鼠选用直径为0.254 mm                    3.1  大鼠神经功能评分结果
        的鱼线，体质量为 280～300 g 的大鼠选用直径为 0.286                       与假手术组比较，模型组大鼠的神经功能评分显著
        mm 的鱼线，将鱼线剪成 6 cm 的长度，分别在 2、3、4、5                   升高（P＜0.05），表明模型复制是成功的（评分在 2 分以
        cm 处用黑色标记笔作一标记，插入前浸泡在生理盐水                           上即可说明模型复制成功）。与模型组比较，芪蛭通络
        中，于 95 ℃烘箱中烘干，使鱼线具有一定的硬度，并在                         胶囊成品组、芪蛭通络胶囊活血化瘀药味组以及芪蛭通
        鱼线前端沾适量石蜡，避免鱼线前端上的毛刺划伤大鼠                            络胶囊缺活血化瘀药味组大鼠的神经功能评分均显著
        大脑），放开ICA上的动脉夹，轻推鱼线，使之由CCA通                         降低（P＜0.05），但三组间差异无统计学意义（P＞0.05），
        过分叉部进入 ICA，直至大脑中动脉的起点，阻断大脑                          说明各组对脑缺血再灌注大鼠神经功能均具有改善作
        中动脉的血液供应，插入深度由分叉处计算约 20 mm                          用。各组大鼠神经功能评分结果见表1。
        （鱼线上 2 cm 标记大致位于分叉处），结扎 ICA 下的鱼                     3.2 大鼠脑梗死率测定结果
        线，固定鱼线的位置。手术完成后，逐层缝合颈部切口，                               与假手术组比较，模型组大鼠脑梗死率显著升高
        用碘酒消毒。注意在手术过程中和手术结束后都要维                            （P＜0.05）。与模型组比较，芪蛭通络胶囊成品组、芪蛭
        持大鼠的体温在37 ℃左右。缺血2 h后拔除鱼线，再灌                         通络胶囊活血化瘀药味组和芪蛭通络胶囊缺活血化瘀
        注24 h。假手术组大鼠手术过程与模型组相同，但不插                          药味组大鼠的脑梗死率均显著降低（P＜0.05），说明各
        入鱼线。                                                组对脑缺血再灌注大鼠脑梗死均具有改善作用。其中，
        2.4  检测指标                                           芪蛭通络胶囊活血化瘀药味组大鼠脑梗死率降低程度


        ·2676  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 19                                中国药房    2019年第30卷第19期
   84   85   86   87   88   89   90   91   92   93   94