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察指标。而该方中的上述活性成分，特别是绿原酸、苦 量：10 μL。
杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷 2.2 供试品溶液制备
和藁本内酯，均是发挥活血消肿、通络散瘀等药理活性 2.2.1 正交试验优选提取方法 取消栓肠溶胶囊（批
的主要成分，其含量大小对消栓肠溶胶囊的质量具有一 号：20180105），以不同提取溶剂（A）、料液比（B）和超声
定影响，故笔者建议将这些成分纳入质量标准中加以 （功率：250 W，频率：40 kHz）时间（C）为考察因素，每因
控制。 素设计3水平，按L9 （3）正交表进行试验。以绿原酸、苦
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在含量测定中，本研究通过设计L9 （3）正交试验，优 杏仁苷、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷
化消栓肠溶胶囊中活性成分提取方法，以最大程度地提 和藁本内酯的含量的综合评分为指标，各成分权重系
取出这 7 个活性成分；再采用高效液相色谱（HPLC）-波 数 均为 1/7，综合评分＝1/7×绿原酸含量+1/7×苦杏仁
[14]
长切换法，建立同时测定样品中绿原酸、苦杏仁苷、芍药 苷含量+1/7×芍药苷含量+1/7×阿魏酸含量+1/7×洋川芎
苷、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷和藁本内酯含 内酯Ⅰ含量+1/7×毛蕊异黄酮苷含量+1/7×藁本内酯含
量的方法，以进一步完善消栓肠溶胶囊质量检测标准， 量。正交试验因素、水平、设计与结果见表 1，方差分析
为客观科学评价消栓肠溶胶囊质量提供参考依据。
结果见表2。
1 材料
表1 正交试验因素、水平、设计与结果
1.1 仪器
Tab 1 Factors，levels，design and results of orthogo-
e2695 HPLC 仪，包括 2695Alliance 四元梯度泵、
nal tests
2998 二极管阵列检测器（美国 Waters 公司）；ML204 电
含量，mg/g
子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；S180H 超声清洗器 序号 A（提取溶剂） B（料液 C（超声时 苦杏 洋川芎 毛蕊异 藁本 综合
比） 间），min 绿原酸 芍药苷 阿魏酸 评分
（德国Elma 公司）。 仁苷 内酯Ⅰ 黄酮苷 内酯
1 30％甲醇（A1） 1∶10（B1） 30（C1） 0.268 0.234 2.637 2.690 0.398 0.552 1.434 1.173
1.2 药品与试剂
2 30％甲醇（A1） 1∶30（B2） 90（C3） 0.271 0.284 2.663 2.804 0.438 0.732 1.533 1.246
消栓肠溶胶囊（三门峡赛诺维制药有限公司，批号： 3 30％甲醇（A1） 1∶50（B3） 60（C2） 0.253 0.324 2.660 2.863 0.460 0.884 1.590 1.291
20180105、20180106、20180301、20180302、20180501、 4 70％甲醇（A2） 1∶10（B1） 60（C2） 0.216 0.395 2.597 2.621 0.333 0.525 1.441 1.161
5 70％甲醇（A2） 1∶30（B2） 30（C1） 0.237 0.397 2.620 2.679 0.363 0.597 1.493 1.198
20180502，规格：0.2 g）；绿原酸（批号：111521-201708， 6 70％甲醇（A2） 1∶50（B3） 90（C3） 0.225 0.396 2.635 2.711 0.361 0.625 1.495 1.207
纯度：95.1％）、苦杏仁苷（批号：110820-201506，纯度： 7 甲醇（A3） 1∶10（B1） 90（C3） 0.209 0.351 2.584 2.266 0.302 0.334 1.326 1.053
8 甲醇（A3） 1∶30（B2） 60（C2） 0.220 0.401 2.601 2.532 0.311 0.505 1.415 1.141
93.4％）、芍药苷（批号：110736-201741，纯度：95.7％）、
9 甲醇（A3） 1∶50（B3） 30（C1） 0.227 0.407 2.596 2.591 0.316 0.633 1.441 1.173
毛蕊异黄酮苷（批号：111920-201505，纯度：97.1％）、阿 K1 3.710 3.388 3.544
魏酸（批号：110773-201614，纯度：99.0％）、藁本内酯（批 K2 3.566 3.585 3.592
K3 3.367 3.670 3.506
号：111737-201507，纯度：≥99.0％），上述各对照品均购 R 0.343 0.283 0.086
自中国食品药品检定研究院；洋川芎内酯Ⅰ对照品（成
表2 方差分析结果
都瑞芬思生物科技有限公司，批号：Y-085-170609，纯
Tab 2 Analysis of variance
度：≥98.0％）；甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析
方差来源 平方和 自由度 均方 F P
纯，水为娃哈哈纯净水。 A（提取溶剂） 0.020 2 0.010 33.169 0.029
2 方法与结果 B（料液比） 0.014 2 0.007 23.715 0.040
C（超声时间） 0.001 2 0.001 2.127 0.320
2.1 色谱条件 误差 0.001 2 0.000
色谱柱：Agilent Eclipse Plus C18 （250 mm×4.6 mm，5 总计 12.622 9
校正的总计 0.036 8
μm）；流动相：乙腈（A）-0.1％磷酸溶液（B），梯度洗脱
（0～10 min，10％A；10～15 min，10％→25％A；15～20 从表 1 可直观看出，各因素对综合评分的影响顺序
min，25％→30％A；20～35 min，30％→60％A；35～50 为 A＞B＞C，最优组合为 A1B3C2；据表 2 结果可知，因素
min，60％ →80％ A；50～60 min，80％ A；60～75 min， A和B对综合评分指标有显著影响（P＜0.05），因素C无
80％→90％A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：326 nm 显著影响（P＞0.05），这与表1直观分析结果一致。由正
（0～12 min，检测绿原酸）、210 nm（12～15.5 min，检测 交试验可得出，最优提取条件为：每 1 g 供试品以 50 mL
苦杏仁苷）、230 nm（15.5～20 min，检测芍药苷）、321 nm 30％甲醇为提取溶剂，超声处理60 min。按上述最优提
（20～30 min，检测阿魏酸）、334（30～45 min，检测洋川 取方案，分别提取3份，计算绿原酸、苦杏仁苷、芍药苷、
芎内酯Ⅰ）、274 nm（45～50 min，检测毛蕊异黄酮苷）、 阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷和藁本内酯的平
260 nm（50～75 min，检测藁本内酯）；柱温：35 ℃；进样 均含量分别为 0.236、0.377、2.655、2.747、0.353、0.548、

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