Page 32 - 《中国药房》2026年10期
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公司；卵清蛋白（ovalbumin，OVA；货号A5503）购自美国                  除 Normal 组外，其余各组参照 OVA 双重致敏联合雾化
          Sigma公司；氢氧化铝（批号E-50531）购自天津市化学试                     激发的经典方法构建BA模型            [16―17] ：分别于实验第0、7天
          剂三厂；大鼠免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）、IL-              腹腔注射含 OVA 和氢氧化铝各 100 mg 的混悬液（以生
          4、IL-5、IL-13、TNF-α 酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂                理盐水为溶剂）1 mL；于实验的第14天起，将大鼠置于4
          盒（货号分别为241224355R、241224309R、241224311R、            L 有机玻璃雾化箱内，使其持续雾化吸入 2%OVA 生理
          241224317R、241224305R）均购自江苏酶免实业有限公                  盐水溶液，每天 30 min（雾化气流速为 0.3 mL/min，维持
          司；Wright-Giemsa 染液、苏木精染液、伊红染液、改良                    箱内 OVA 浓度为 20 mg/m），连续 21 d。以连续 2 次
                                                                                     3
          Masson 三色染色试剂盒、过碘酸希夫（periodic acid-                 OVA 滴鼻激发实验阳性为造模成功 。Normal 组大鼠
                                                                                             [18]
          Schiff，PAS）染色试剂盒（货号分别为 G1015、H8070、                 以磷酸盐缓冲液（PBS）进行相同操作。于实验的第
          G1100、G1346、G1280）均购自北京索莱宝科技有限公                     14～34 天，YQWY-L、YQWY-M、YQWY-H 组大鼠分别
          司；TransZol Up Plus RNA 试剂盒（货号 ER501）购自北             灌胃低、中、高剂量的“2.1”项下相应药液，灌胃体积均为
                                                 TM
          京全式金生物技术股份有限公司；PrimeScript  RT Mas‐                 5 mL/kg[剂量按成人（体重 60 kg）与大鼠体表面积换算
          ter Mix 试剂（货号 RR036B）购自日本 TaKaRa 公司；                系数计算而得；YQWY 低、中、高剂量分别为 5、10、20
          Magic SYBR Mixture 试剂（货号 CW3008S）购自江苏康              g/kg（按生药量计），分别相当于临床等效剂量的 0.4、
          为世纪生物科技股份有限公司；兔抗甘油醛-3-磷酸脱氢                          0.8、1.6倍]；DEX组大鼠灌胃0.5 mg/kg的地塞米松药液
          酶（GAPDH）抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊
                                                             （以生理盐水为溶剂制成2 g/L的药液，剂量根据前期预
          抗兔 IgG 二抗、全蛋白提取试剂盒、BCA 蛋白含量检测
                                                              实验结果设置）；Normal 组和 Model 组大鼠灌胃等体积
          试 剂 盒（ 货 号 分 别 为 KGC6102-1、KGC6202-0.1、
                                                              生理盐水。上述药液/生理盐水干预均于每天雾化激发
          KGB5303-100、KGP902）均购自江苏凯基生物技术股份
                                                              前1 h完成。
          有限公司；兔抗 TLR4、MyD88、NF-κB p65 抗体（货号分
                                                              2.3 哮喘体征评分
          别为 19811-1-AP、29946-1-AP、10745-1-AP）均购自武汉
                                                                                                     [19]
                                                                  末次雾化后 24 h，采用改良 Hessel 评分法 对各组
          三鹰生物技术有限公司；兔抗磷酸化 NF-κB p65（phos‐
                                                              大鼠进行哮喘体征评分。该评分法以呼吸频率、节律、
          phorylated NF-κB p65，p-NF-κB p65）抗体（货号AF2006）
                                                              辅助呼吸肌动用、哮鸣音、立毛、搔鼻、活动度及激惹反
          购自美国 Affinity 公司；3-3′-二氨基联苯胺（DAB）染色
                                                              应 8 项指标为基准，每项 0～3 分、总分 0～24 分，得分越
          试剂盒（货号 ZLI-9017）购自北京中杉金桥生物技术有
                                                              高提示气道高反应性及全身应激越显著。由2名受过一
          限公司；PCR所用引物由生工生物工程（上海）股份有限
                                                              致性培训的实验员独立完成评估。
          公司设计、合成。
                                                              2.4 样本收集与处理
          1.3 实验动物
                                                                  评分结束后，使大鼠禁食、不禁水24 h，经腹腔注射
              SPF级雄性SD大鼠48只，体重180～220 g，购自浙
                                                              2% 戊巴比妥钠实施麻醉，随后从腹主动脉采集血液 5
          江维通利华实验动物技术有限公司，动物生产许可编号
                                                              mL，在4 ℃下以1 500 r/min离心10 min，分离上层血清，
          为 SCXK（浙）2024-0001。所有大鼠均饲养于恒温恒湿
          环境（室温 22～25 ℃、相对湿度 40%～60%，每 12 h 光                 于－80 ℃下保存，备用。采血结束后，将各组大鼠以颈
          照/黑暗循环）中，经7 d适应性饲养后启动正式实验。本                         椎脱臼法处死，结扎其左支气管并作钝性分离处理，将
          研究方案已通过江西中医药大学实验动物伦理委员会                             注射针插入气管约 1 cm 处，向肺内缓慢推注 2.5 mL 预
          审批（批准文号 JZLLSC20250561），且实验全过程严格                    冷生理盐水，推注时长控制在 1 min，反复抽吸 3 次后收
          遵循实验动物3R原则。                                         集灌洗液（上述操作重复 3 次）；将所得灌洗液以 1 500
          2 方法                                                r/min 离心 10 min，留取上层支气管肺泡灌洗液（bron‐
          2.1 YQWY药液的制备                                       choalveolar lavage fluid，BALF）于－20 ℃下保存，备用。
              取生黄芪、白术、防风、桂枝、白芍、生姜、大枣、炙甘                       随后，摘取各组大鼠左肺组织，放入4%多聚甲醛溶液中
          草、仙茅、淫羊藿饮片，按质量比2∶1.5∶1.5∶1∶1∶1∶1∶0.5∶               固定，后续行石蜡包埋处理；同时，剪取其右肺组织碎
          1∶1.5 混合，加 8 倍量水，浸泡 30 min 后，煎煮（待沸腾后                块，于液氮中速冻后再于－80 ℃下保存，备用。
          再持续煎煮1 h），过滤；药渣加6倍量的水，煎煮40 min，                     2.5 血清IgE水平和BALF中炎症因子水平检测
          过滤。合并两次滤液，浓缩，分别制成质量浓度为 1、2、                             取“2.4”项下各组大鼠的血清和BALF各适量，按相
          4 g/mL（以生药量计）的药液，备用。                                应ELISA试剂盒说明书操作，使用酶标仪检测其血清中
          2.2 分组、造模与给药                                        IgE水平和BALF中IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α水平。
              选取48只大鼠，随机分为正常组（Normal组）、模型                     2.6 BALF中炎症细胞计数
          组（Model组）、地塞米松组（DEX组）和YQWY低、中、高                         取“2.4”项下各组大鼠的 BALF 适量，以 PBS 重悬，
          剂量组（YQWY-L、YQWY-M、YQWY-H 组），每组 8 只。                 并用Wright-Giemsa染料染色，使用生物显微镜，按形态


          · 1266 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 10                            中国药房  2026年第37卷第10期
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