Page 73 - 《中国药房》2025年23期
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statistically  significant  difference  in  the  above  indicators  between  the  H-BYHWD+solvent  control  group  and  the  H-BYHWD  group
         （P＞0.05）.  CONCLUSIONS  BYHWD  may  improve  CIRI  by  activating  the AMPK/Drp1  pathway  and  ameliorating  mitochondrial
          dynamic disorders.
          KEYWORDS    Buyang huanwu decoction； cerebral ischemia-reperfusion injury； AMPK/Drp1 pathway； mitochondrial dynamics



              脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia-reperfusion in‐     司；1%四氧化锇固定液（货号O8020）购于上海麦克林生
          jury，CIRI）是指组织或器官在缺血缺氧后恢复血液供应                      化科技有限公司；醋酸铀酰染液（货号U5394）购于美国
          时，反而出现更严重的功能障碍或结构破坏的现象。                            Sigma-Aldrich 公司；JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒（货
          CIRI 常见于缺血性脑卒中溶栓、取栓等血流再通治疗                         号C2006）购于上海碧云天生物技术有限公司；兔抗线粒
                              [1]
          后，发生率为25%～50% ，其严重程度直接影响患者的                        体融合蛋白 2（mitofusin 2，MFN2）、视神经萎缩蛋白 1
                      [2]
          神经功能预后 。近年来研究发现，线粒体动力学失衡，                         （optic atrophy 1，OPA1）、分化簇31（cluster of differentia‐
          即线粒体分裂与融合的稳态被破坏，是CIRI的关键病理                         tion 31，CD31）、线粒体分裂蛋白 1（mitochondrial fission
          机制；动力相关蛋白 1（dynamin-related protein 1，Drp1）        1 protein，Fis1）、磷酸化 AMPK（phosphorylated AMPK，
          作为调控线粒体分裂的关键蛋白，其过度活化会导致线                           p-AMPK）、AMPK、磷酸化Drp1（phosphorylated Drp1，p-
                                     [3]
          粒体碎片化，进而引发细胞凋亡 。因此，靶向抑制Drp1                        Drp1）、Drp1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-
          介导的过度线粒体分裂，已成为神经保护研究的重要策                           phosphate dehydrogenase，GAPDH）单克隆抗体（货号分
          略。AMP 活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，         别 为 ab260861、 ab157457、 ab281583、 ab158865、
          AMPK）作为细胞能量代谢的核心调控因子，不仅能调                          ab92701、ab32047、ab314755、ab156951、ab128915）及辣
          节能量代谢，还可直接磷酸化 Drp1，抑制其向线粒体转                        根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（货号
          位与活化，从而维持线粒体动力学稳定，发挥神经保护                           ab205719）均购于英国Abcam公司。
              [4]
          作用 。这表明，AMPK/Drp1通路可能是调节线粒体动                       1.3 实验动物
          力学失衡的内在机制。                                             SPF 级雄性 SD 大鼠，7～8 周龄，体重 240～340 g，
              补阳还五汤（BYHWD）源自清代名医王清任的《医                       由武汉有度生物科技有限公司提供，生产许可证号为
          林改错》，是中医“益气活血”治法的经典代表方剂，全方                         SCXK（鄂）2021-0025。大鼠饲养环境的温度为 20～
          由黄芪（君药）、当归、赤芍、桃仁、川芎、红花、地龙组成，                       24 ℃，相对湿度为 40%～50%，12 h 明暗交替。本动物
          具有益气、活血、通络的功效。基础和临床研究均证实，                          实验经武汉有度生物科技有限公司动物伦理委员会批
          BYHWD 对 CIRI 大鼠具有明确的神经保护作用               [5―6] ，但  准（批准号为202409425）。
          具体机制尚不清晰。本研究基于 AMPK/Drp1 通路，探                      2 方法
          究BYHWD对CIRI大鼠线粒体动力学的影响及机制，旨                        2.1 BYHWD的制备
          在为阐明该方的作用机制提供参考。                                       按相关文献方法 制备 BYHWD：称取黄芪 120 g、
                                                                                [7]
          1 材料                                               当归 6 g、赤芍 4.5 g，以及桃仁、川芎、红花、地龙各 3 g，
          1.1 主要仪器                                           加入10倍量水浸泡30 min，首次煎煮1 h后滤渣，药渣加
              本研究所用主要仪器包括 JEM-1230 型透射电镜                     5 倍量水再煎煮 1 h，合并 2 次煎液并浓缩至 100 mL，于
         （日本 JEOL 公司）、EM UC7 型超薄切片机（德国 Leica                 4 ℃冰箱保存备用。
          公司）、Eppendorf 5810R 型高速离心机（德国 Eppendorf            2.2 造模
                                                                             [8]
          公司）、BD FACSCanto Ⅱ型流式细胞仪（美国 BD 公                       根据文献方法 构建CIRI大鼠模型：术前93只大鼠
          司）、BX53型荧光倒置显微镜（日本Olympus公司）、GS-                   禁食 12 h，不禁水，腹腔注射（ip）1% 戊巴比妥钠麻醉后
          800型凝胶扫描成像系统（美国Bio-Rad公司）等。                        以仰卧位固定，暴露颈总动脉（common carotid artery，
          1.2 主要药品与试剂                                        CCA），分离颈内动脉和颈外动脉（external carotid ar‐
              黄芪、当归、赤芍、桃仁、川芎、红花、地龙饮片均购                       tery，ECA），结扎 ECA 和 CCA 近心端，造成缺血状态；2
          自北京同仁堂药店，由武汉市中医医院综合药学部主管                           h 后恢复再灌注。再灌注 24 h 后，根据 Zea-Longa 评分
                                                               [9]
          中药师黄慧鉴定均为真品；银杏叶提取物注射液[阳性                           法 评估大鼠神经功能：神经功能无异常为0分；提尾时
          对照，规格 5 mL∶17.5 mg（含银杏黄酮苷 4.2 mg），货号               左前肢屈曲为1分；运动方向异常为2分；明显行走障碍
          NB169]购自悦康药业集团股份有限公司；2，3，5-氯化三                     为 3 分；无法自主行走伴意识障碍为 4 分。评分 1～3 分
          苯基四氮唑（TTC）染液和柠檬酸铅染液（货号分别为                          者视为造模成功，0分者视为造模失败，4分者予以剔除。
          T8170、L1010）均购于上海源叶生物科技有限公司；                       造模操作实验过程中，术后感染、意外出血等导致大鼠
          AMPK抑制剂Compound C、2.5%戊二醛固定液（货号分                   死亡1只，造模失败2只。另取15只大鼠作为假手术组，
          别为 ICA13550、G1102）均购于北京索莱宝科技有限公                    除不结扎外，其余按上述操作。


          中国药房  2025年第36卷第23期                                              China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 23    · 2947 ·
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