Page 29 - 《中国药房》2025年6期

2 方法与结果 RSD均小于2.63％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放
2.1 指纹图谱的建立 置24 h内稳定性良好。

2.1.1 色谱条件 2.1.6 重复性试验
取样品（编号S11），共6份，按“2.1.2”项下方法制备
以 Zafex JX-C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱
供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以金
柱；以磷酸氢二钠缓冲液（6 mmol/L，pH 6.5）-0.02％磷酸
丝桃苷为参照峰，得各共有峰相对保留时间的RSD均小
溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱（见表2）；检测波长为
于0.10％（n＝6），相对峰面积的RSD均小于2.13％（n＝
354 nm（0～58 min，绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、 6），表明方法的重复性良好。
萹蓄苷、槲皮苷、槲皮素）、290 nm（58～60 min，贯叶金 2.1.7 指纹图谱建立与相似度评价
丝桃素）、590 nm（60～65 min，金丝桃素）；流速为 1 取 20 批样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，
mL/min；柱温为30 ℃；进样量为5 μL。 再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定。将所得数据导入
表2 梯度洗脱条件 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，以S11
样品为参照图谱（各峰信号强、分离度好），设置时间窗
t/min 磷酸氢二钠缓冲液/％ 0.02％磷酸溶液/％ 乙腈/％
0 0 88 12 为 0.1 min，以平均数法生成对照图谱，经多点校正和
20 0 78 22 Marker 峰匹配后，得到样品的叠加指纹图谱、对照指纹
40 0 65 35
50 0 21 79 图谱（R）及混合对照品图谱（图1）。最终确定16个共有
51 21 0 79 峰，共指认出9个峰，分别为绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异
65 21 0 79 槲皮苷、萹蓄苷、槲皮苷、槲皮素、贯叶金丝桃素和金丝
2.1.2 供试品溶液的制备 桃素。对20批样品与对照图谱进行相似度评价，结果显
取贯叶金丝桃粉末（过三号筛）约2 g，精密称定，置 示，各批样品与对照图谱的相似度为0.889～0.987，均大
于具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇50 mL，称重，加热 于0.850，表明贯叶金丝桃中各色谱峰组成相似，所建指
回流1 h，放冷，再次称重，用60％乙醇补足减失的质量， 纹图谱可用于初步控制贯叶金丝桃的整体质量。
摇匀，经 0.22 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品 1 2 3 45 6 789 10 11 12 13 14 15 16
3 000 R
S20
溶液。 2 500 S19
S18
S17
S16
2.1.3 对照品溶液的制备 2 000 S15
S14
S13
S11
取绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、萹蓄苷、槲皮 mAU 1 500 S12
S10
S9
1 000 S8 S7
苷、槲皮素、贯叶金丝桃素对照品各适量，精密称定，分 500 S6 S5
S3 S4
别置于5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即得各单一对照 0 S2 S1
0 10 20 30 40 50 60
品储备液。取金丝桃素对照品适量，精密称定，置于 5 t/min
A. 20批贯叶金丝桃的叠加指纹图谱及对照指纹图谱
mL 容量瓶中，加二甲基亚砜（DMSO）1 mL 溶解，再加
6
50％甲醇至刻度，即得金丝桃素对照品储备液。精密量 5 8 9 11
40
取上述各单一对照品储备液，置于5 mL容量瓶中，加甲 4
60
醇定容，即得绿原酸、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷、萹蓄
苷、槲皮苷、槲皮素、贯叶金丝桃素、金丝桃素质量浓度 mAU 20 3 15 16
10
分 别 为 37.08、41.92、47.28、51.66、46.16、49.80、39.84、
0
24.40、39.60 μg/mL的混合对照品溶液。
0 10 20 30 40 50 60
2.1.4 精密度试验 t/min
B.混合对照品溶液的HPLC图
取“2.1.2”项下供试品溶液（编号 S11），按“2.1.1”项 3：绿原酸；4：芦丁；5：金丝桃苷；6：异槲皮苷；8：萹蓄苷；9：槲皮
下色谱条件连续进样6次，以金丝桃苷为参照峰，得各共 苷；11：槲皮素；15：贯叶金丝桃素；16：金丝桃素。
有峰相对保留时间的RSD均小于0.10％（n＝6），相对峰 图1 贯叶金丝桃的叠加指纹图谱及混合对照品的
面积的 RSD 均小于 2.96％（n＝6），表明仪器的精密度 HPLC图
良好。 2.2 多成分含量测定
2.1.5 稳定性试验 2.2.1 混合对照品溶液的制备
取“2.1.2”项下供试品溶液（编号 S11），分别在制备 分别精密称取“2.1.3”项下绿原酸、芦丁、金丝桃苷、
后于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1.1”项下色谱 异槲皮苷、萹蓄苷、槲皮苷、槲皮素对照品储备液适量，
条件进样测定，以金丝桃苷为参照峰，得各共有峰相对 置于5 mL容量瓶中，加甲醇定容，即得上述各成分质量
保留时间的 RSD 均小于 0.09％（n＝6），相对峰面积的 浓 度 分 别 为 29.90、86.52、132.30、30.82、19.60、20.14、

中国药房 2025年第36卷第6期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 6 · 663 ·