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脓毒症相关性脑病（sepsis-associated encephalopa‐        assay，ELISA）试剂盒（上海通蔚生物科技有限公司，批
          thy，SAE）是脓毒症最常见的并发症之一，其主要临床特                       号分别为220306、230102、221205、220910），尼氏染色液
          征包括运动能力减弱、注意力减退、定向障碍、谵妄或昏                         （北京兰杰柯科技有限公司，批号BL1039A）。
              [1]
          迷等 。SAE是导致患者死亡率增加和长期后遗症发生                          1.3 动物
          的重要原因，给患者、家属和整个社会带来了巨大的经                               本研究所用动物为 SPF 级雄性 SD 大鼠，共 72 只，8
                      [2]
          济和精神负担 。目前，临床尚无 SAE 确定性疗法。研                        周龄，体重 300～310 g，均购自贵州医科大学实验动物
                                             [3]
          究表明，神经炎症参与了SAE的发病机制 。因此，开发                         中心，生产许可证号为SCXK（贵）2023-0002。本实验遵
          抑制神经炎症的药物对于SAE的治疗具有重要意义。                           循实验动物的伦理和使用准则，并经熠品（贵阳）质量科
              紫草素是从紫草中提取的活性物质之一，具有抗                          技有限公司动物实验中心医学伦理委员会审核通过（伦
                       [4]
          炎、镇痛等作用 。已有研究报道，紫草素可缓解神经精                          理批号为202303012）。
                                           [5]
          神性系统性红斑狼疮小鼠的神经炎症 ，抑制帕金森病                           2 方法
                      [6]
          大鼠神经炎症 ，减轻脑缺血/再灌注损伤大鼠小胶质细                          2.1 SAE大鼠模型的构建
                                  [7]
          胞促炎极化介导的神经炎症 ，减轻脓毒症并发症——                               腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥钠麻醉大鼠，暴露并结
                                              [8]
          急性肺损伤大鼠的全身炎症和肺细胞凋亡 。以上研究                           扎盲肠。用注射器针头刺穿盲肠2次，挤压粪渣使其流
          提示，紫草素可能具有改善神经炎症的作用。此外，相                           入腹膜，将盲肠复位并缝合伤口。术后24 h若大鼠表现
          关研究阐明，阻断环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶（cyclic gua‐                   出翻正、角膜反射、甩尾、耳郭反射等行为，表明 SAE 大
          nosine  monophosphate-adenosine  monophosphate  syn‐  鼠模型构建成功 。
                                                                           [11]
          thase，cGAS）-干扰素基因刺激因子（stimulator of inter‐         2.2 分组与给药
          feron gene，STING）信号通路的转导可减轻蛛网膜下腔                       将大鼠随机分为 SAE 组，紫草素低、中、高剂量组，
                                        [9]
          出血诱导的脑损伤大鼠的神经炎症 。有研究显示，抑                           紫草素高剂量+Roc A 组和对照组，每组 12 只。对照组
          制cGAS可显著恢复SAE小鼠的认知功能障碍，而激活                         大鼠不进行结扎与刺穿盲肠处理；其余各组均按“2.1”项
          cGAS会促进SAE的疾病进展 。但紫草素能否通过调                         下操作建立 SAE 大鼠模型，造模成功率为 100%。造模
                                   [10]
          节 cGAS-STING 信号通路影响 SAE 大鼠神经炎症尚不                   成功后，紫草素低、中、高剂量组大鼠分别腹腔注射
          可知。基于此，本研究拟通过构建 SAE 大鼠模型，观察                        1.33、2.66、5.32 mg/kg紫草素 ；紫草素高剂量+Roc A组
                                                                                      [12]
          紫草素对SAE大鼠神经炎症的影响，并从cGAS-STING                      大鼠腹腔注射5.32 mg/kg紫草素和0.67 mg/kg Roc A ；
                                                                                                          [13]
          信号通路出发探究其可能机制，以期为紫草素治疗SAE                          SAE 组、对照组大鼠分别腹腔注射等体积的生理盐水；
          提供实验依据。                                            每天给药1次，持续14 d。
          1 材料                                               2.3 大鼠学习记忆能力的测定
          1.1 主要仪器                                               末次给药结束后24 h，选取所有大鼠进行Y迷宫实
              本研究所用主要仪器有 YH-AVTAS 型自动视频跟                     验，以评估大鼠的学习记忆能力。Y 迷宫由 3 个白色不
          踪系统（武汉一鸿科技有限公司）、DFM-90C型荧光显微                       透明的“臂”组成，每个“臂”的尺寸为 30 cm×5 cm×20
          镜（上海蔡康光学仪器有限公司）、GelDoc XR+型凝胶                      cm，每个“臂”之间的夹角为 120°。在实验中，3 个“臂”
          成像系统（美国 Bio-Bad 公司）、High-Speed Centrifuge          依次命名为“开始臂”“新臂”“旧臂”。首先进行训练，即
          CR22N 型离心机（德国 Eppendorf 公司）、KD-3398 型组             大鼠首先被放置在“开始臂”中，挡板挡住“新臂”，大鼠
          织切片机（浙江省金华市科迪仪器设备有限公司）等。                           被允许在“开始臂”“旧臂”之间自由探索15 min；1 h后开
          1.2 主要药品与试剂                                        始测试，大鼠被放在“开始臂”，除去挡板，“新臂”被激
              本研究所用的主要药品与试剂有紫草素原料药、                          活，大鼠有5 min的时间在3个“臂”内进行自由探索。记
          cGAS-STING信号通路激活剂Roc A对照品（美国MCE                    录大鼠在每个“臂”内移动的距离，并计算“新臂”内活动
          公司，批号分别为 HY-N0822、HY-19356，纯度分别为                   距离百分比。“新臂”内活动距离百分比（%）＝“新臂”内
          99.53%、98.61%），兔源 CD86、CD206 一抗（美国 CST 公           活动距离/活动总距离×100%。
          司，批号分别为 91882、59414），兔源 cGAS、甘油醛-3-磷               2.4 大鼠焦虑行为的观察
          酸脱氢酶（GAPDH）、STING 一抗及辣根过氧化物酶标                         “2.3”项下实验完成后，选取全部大鼠进行旷场实
          记的羊抗兔 IgG 二抗（美国 Thermo Fisher Scientific 公         验，以评估大鼠的焦虑行为。实验装置是一个不透明的
          司 ，批 号 分 别 为 PA5-121188、PA1-987、PA5-116052、        白色立方体，尺寸为 50 cm×50 cm×40 cm。将每只大
          31460），大鼠白细胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、肿          鼠分别置于箱中，背对箱壁一侧，允许其自由探索 5
          瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、IL-4、       min。使用自动视频跟踪系统记录大鼠 5 min 内在中心
          IL-10 酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent         区域的停留时间及行走距离。


          中国药房  2024年第35卷第21期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 21    · 2641 ·
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