Page 76 - 《中国药房》2024年12期
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2 方法                                                2.4 大鼠肾组织中氧化应激指标检测
          2.1 造模、分组与给药                                            取“2.3”项下各组大鼠冻存的肾组织适量，制备组织

              96 只 雌 性 大 鼠 以 高 脂 高 糖 饲 料（含 普 通 饲 料            匀浆，以7 400 r/min离心，取上清液，参照ELISA试剂盒
          54.6%、猪油 16.9%、蔗糖 14%、酪蛋白 10.2%、预混料                 说明书方法操作，以酶标仪检测其肾组织中 SOD、
          2.1%、麦芽糊精 2.2%）喂养，48 只雄性大鼠以普通饲料                     MDA、GSH-Px水平。
          喂养。8 周后，将雌性大鼠和雄性大鼠按 2∶1 的比例合                        2.5 大鼠肾组织中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达检测
          笼，以雌性大鼠检出阴道栓为受孕成功，记为妊娠第 1                               取“2.3”项下各组大鼠冻存的肾组织适量，加入
          天。参照文献[8]的方法，于妊娠第1天给予大鼠单次腹                          RIPA蛋白裂解液裂解、离心，取上清液，蛋白经定量、变
          腔注射链脲佐菌素 35 mg/kg，3 d 后检测其空腹血糖                      性后进行电泳分离、转膜、封闭；以PBST缓冲液洗膜后，

         （fasting blood glucose，FBG）水平，若超过 13.5 mmol/L        加入 Nrf2、HO-1、NQO1、β-actin 一抗（稀释比例分别为
          则表示GDM模型复制成功。选取造模成功的妊娠期大                            1∶920、1∶920、1∶1 030、1∶1 240），4 ℃下孵育过夜；以
          鼠60只，随机分为模型组、盐酸二甲双胍组、芍药苷低剂                          PBST 缓冲液洗膜后，加入相应二抗（稀释比例为 1∶
          量组、芍药苷高剂量组、芍药苷+ML385 组，每组 12 只。                     3 400），37 ℃下孵育2 h；以PBST缓冲液洗膜后，运用化
                                                              学发光显色试剂显色，置于凝胶成像系统下成像。以
          另取均以普通饲料饲养 8 周的雌性大鼠和雄性大鼠按
                                                              β-actin 为内参，计算各组大鼠肾组织中 Nrf2、HO-1、
          2∶1的比例合笼，选取受孕成功的妊娠期大鼠12只作为
                                                              NQO1蛋白的表达水平。
          对照组。
                                                              2.6 统计学方法
              盐酸二甲双胍组大鼠灌胃盐酸二甲双胍200 mg/kg
                                                                  采用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。计量资
         （将盐酸二甲双胍以生理盐水溶解，制成质量浓度为 20
                                                              料以 x ˉ±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一
                                          [9]
          mg/mL 的混悬液，按 10 mL/kg 灌胃） ；芍药苷低、高剂
                                                              步两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
          量组大鼠分别灌胃芍药苷 45、90 mg/kg（将芍药苷以生
                                                              3 结果
          理盐水溶解，制成质量浓度分别为 4.5、9.0 mg/mL 的混
                               [10]
          悬液，按 10 mL/kg 灌胃） ；芍药苷+ML385 组大鼠灌胃                  3.1 芍药苷对GDM大鼠糖代谢指标的影响
                                                                  与 对 照 组 相 比 ，模 型 组 大 鼠 FBG、FINS 水 平 和
          芍药苷90 mg/kg并腹腔注射ML385 30 mg/kg（芍药苷药
                                                              HOMA-IR 均显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，芍药
          液的配制和灌胃方法同前；将 ML385 以生理盐水溶解，
                                                              苷低、高剂量组和盐酸二甲双胍组大鼠FBG、FINS水平
          制成质量浓度为 3 mg/mL 的溶液，按 10 mL/kg 腹腔注
                                                              和 HOMA-IR 均显著降低，且芍药苷高剂量组的改善效
             [11]
          射） ；模型组和对照组大鼠均按 10 mL/kg 灌胃生理盐
                                                              果显著优于低剂量组（P＜0.05）；与芍药苷高剂量组相
          水；每天1次，持续2周。
                                                              比，盐酸二甲双胍组大鼠 FBG、FINS 水平和 HOMA-IR
          2.2 大鼠糖代谢指标及血清炎症因子水平检测
                                                              未 有 明 显 变 化（P＞0.05），而 芍 药 苷 +ML385 组 大 鼠
              末次给药后，大鼠禁食不禁水 12 h，经戊巴比妥钠
                                                              FBG、FINS水平和HOMA-IR均显著升高（P＜0.05）。结
          麻醉后，于腹主动脉取血。一部分全血样品以全自动生
                                                              果见表1。
          化分析仪检测FBG和空腹胰岛素（fasting insulin，FINS）
                                                                表1 各组大鼠糖代谢指标水平比较（x±s，n＝12）
          水平，并计算胰岛素抵抗指数（insulin resistance index，
                                                              组别           FBG/（mmol/L）  FINS/（mU/L）  HOMA-IR
                                              [12]
          HOMA-IR）：HOMA-IR＝FBG×FINS/22.5 。剩余全血                对照组           5.49±1.01    1.31±0.19   0.32±0.06
          样品经静置、离心后收集上层血清，参照 ELISA 试剂盒                        模型组           16.23±2.05 a  3.69±0.38 a  2.66±0.37 a
                                                              芍药苷低剂量组       12.47±1.55 b  2.51±0.24 b  1.39±0.22 b
          说明书方法操作，以酶标仪检测IL-6、TNF-α水平。                         芍药苷高剂量组       8.98±1.23 bc  1.58±0.17 bc  0.63±0.11 bc
          2.3 大鼠肾组织病理变化观察                                     盐酸二甲双胍组       8.83±1.16 b  1.60±0.16 b  0.63±0.10 b
                                                              芍药苷+ML385组    11.74±1.42 d  2.18±0.34 d  1.14±0.18 d
              取血后，颈椎脱臼处死大鼠，打开腹腔，分离肾组
                                                                 a：与对照组相比，P＜0.05；b：与模型组相比，P＜0.05；c：与芍药苷
          织。一部分肾组织于－80 ℃下保存，备用；另一部分经                          低剂量组相比，P＜0.05；d：与芍药苷高剂量组相比，P＜0.05。
          清洗后置于4%多聚甲醛中固定，随后经乙醇梯度脱水、                           3.2 芍药苷对GDM大鼠血清炎症因子水平的影响
          石蜡包埋、切片（厚度约 4 μm），按 HE 染色试剂盒说明                          与对照组相比，模型组大鼠血清 IL-6、TNF-α 水平
          书方法操作，使用显微镜观察各组大鼠肾组织的病理                             均显著升高（P＜0.05）；与模型组相比，芍药苷低、高剂
          变化。                                                 量组和盐酸二甲双胍组大鼠血清IL-6、TNF-α水平均显


          · 1478 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 12                            中国药房  2024年第35卷第12期
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