Page 72 - 《中国药房》2024年11期
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investigated. RESULTS After intervention with high-dose Wuwei baogan pill， liver index of NAFLD mice， serum levels of ALT，
          AST，  FFA，  TC，  TG  and  LDL-C，  the  levels  of  TNF-α，  IL-6  and  IL-1β  in  liver  tissue，  fasting  blood  glucose，  fasting  insulin，
          insulin  resistance  index，  liver  tissue  pathological  score，  proportions  of  fibrotic  staining  area  and  lipid  droplet  staining  area  all
          significantly decreased （P＜0.05）； the level of HDL-C， proportion of glycogen staining area， the phosphorylation of IRS1， PI3K，
          AKT  and  GSK3β  protein  increased  significantly （P＜0.05）；  the  degree  of  liver  cell  necrosis  and  steatosis  was  reduced，  and  the
          fibrotic  lesions  were  alleviated.  The  above  indexes  of  mice  were  improved  in  Wuwei  baogan  pill  low-dose  and  medium-dose
          groups， but there was no statistically significant difference in some indexes. CONCLUSIONS Wuwei baogan pill can regulate lipid
          and  glucose  metabolism  disorders  in  the  liver  of  NAFLD  mice，  and  improve  liver  injury，  the  mechanism  of  which  may  be
          associated with the activation of IRS/PI3K/AKT/GSK3β signaling pathway.
          KEYWORDS     Wuwei  baogan  pill；  non-alcoholic  fatty  liver  disease；  lipid  metabolism；  glucose  metabolism；  inflammatory
          factors； liver injury； IRS/PI3K/AKT/GSK3β signaling pathway


              非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver di-        （批号分别为17509-1-AP、28731-1-AP）均购自武汉三鹰
          sease，NAFLD）是指除由酒精和其他对肝脏有明确损害                       生物技术有限公司；兔源磷酸化IRS1（p-IRS1）单克隆抗
          致病因素所引起的，以脂肪在肝细胞内过度沉积为主要                            体（批号 2381T）购自美国 CST 公司；兔源磷脂酰肌醇 3-
                                   [1]
          病变特征的临床病理综合征 。该疾病与肥胖、脂代谢                            激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）、磷酸化 PI3K（p-
          紊乱、糖尿病等多种代谢性疾病相关，极大地增加了这                            PI3K）、磷酸化 AKT（p-AKT）单克隆抗体（批号分别为
          些慢性代谢性疾病的复杂性，并导致患者食欲不振、体                            AF4670、AF4372、AF4718）均购自江苏亲科生物研究中
          能减弱、腹部胀痛等，严重影响患者的生活质量                    [2―3] 。目   心有限公司；鼠源糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase
          前针对NAFLD多通过调理饮食、加强锻炼、服用保肝药                          kinase 3β，GSK3β）、兔源磷酸化GSK3β（p-GSK3β）单克
          等手段，起到一定的干预作用。然而，对于NAFLD的治                          隆抗体和生物素标记的山羊抗鼠免疫球蛋白G（IgG）二
          疗，目前还没有批准上市的特效药，因此开发治疗                              抗、生 物 素 标 记 的 山 羊 抗 兔 IgG 二 抗（批 号 分 别 为
          NAFLD的新药具有重要意义。                                     ab93926、ab107166、ab6789、ab6721）均购自英国 Abcam
              以中医药为基础开发抗NAFLD药物具有辨证论治                         公司；兔源 β-actin 单克隆抗体（批号 AC026）购自美国
                                                  [4]
          以及多成分、多靶点、多途径的治疗优势和特色 。五味
                                                              ABclonal公司；游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）、白细胞
          保肝丸（降酶丸）是青岛市海慈医疗集团的传统中药制
                                                              介素 6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子 α（tumor ne‐
          剂品种（鲁药制 ZBZ1077），由五味子、丹参、山楂等 5 味
                                                              crosis factor-α，TNF-α）、IL-1β 的酶联免疫吸附测定
                                                        [5]
          中药组成，具有敛阴、活血、保肝降酶（转氨酶）的功效 。
                                                             （ELISA）试剂盒（批号分别为 ZC-38978、ZC-37988、ZC-
          据报道，五味保肝丸对慢性乙型肝炎患者的症状和体征                            39024、ZC-37974）均购自上海茁彩生物科技有限公司；
          具有缓解作用 ；且其对四氯化碳诱导的急性肝损伤大                            苏木精-伊红（HE）染液试剂盒、油红 O 染色试剂盒、
                      [5]
                                [6]
          鼠的肝组织具有保护作用 。以上研究表明五味保肝丸                            Masson 染 色 试 剂 盒（批 号 分 别 为 C0105S、C0157S、
          具有保肝作用。基于此，本研究拟构建 NAFLD 小鼠模
                                                              C0189S）均购自上海碧云天生物技术有限公司。
          型，探讨五味保肝丸对NAFLD的影响，并探讨其可能的
                                                              1.3 实验动物与饲料
          作用机制，以期为五味保肝丸在 NAFLD 中的应用提供
                                                                  本研究所用动物为 C57/BL6J 小鼠，共 60 只，体重
          理论参考。
          1 材料                                                18～20 g，6～8 周龄，由成都达硕实验动物有限公司提
                                                              供，实验动物生产许可证号为 SCXK（川）2019-028。本
          1.1 主要仪器
                                                              研究已通过四川大学华西医院实验动物伦理委员会批
              本研究所用主要仪器有Pannoramic 250型数字切片
                                                              准，批准号为 20211145A。实验期间，小鼠自由饮水和
          扫描仪（匈牙利 3DHISTECH 公司）、BA210Digital 型数
                                                              进食；动物房保持安静，自然采光，温度为 25 ℃。本研
          码显微镜（麦克奥迪实业集团有限公司）、5200型化学发
          光凝胶成像仪（上海天能科技有限公司）、MK3型全功能                          究所用高脂高糖饲料购买于北京科澳协力饲料有限
          酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、DMI1 型倒         公司。
          置生物显微镜（德国Leica公司）等。                                 2 方法
          1.2 主要药品与试剂                                         2.1 分组、造模与给药
              五味保肝丸（批号 181023）由青岛市海慈医疗集团                          将 60 只 C57/BL6J 小鼠随机分为造模组（n＝50）和
          制剂室提供；多烯磷脂酰胆碱胶囊（阳性对照，批号                             正常组（n＝10）。正常组小鼠给予正常饲料，造模组小
          8BJD217，规格 228 mg）购自赛诺菲（北京）制药有限公                    鼠给予高脂高糖饲料，持续喂养 19 周，以建立 NAFLD
                                                                  [7]
          司；兔源胰岛素受体底物 1（insulin receptor substrate 1，         模型 。造模完成后，每组抽检2只小鼠进行HE染色以
          IRS1）、蛋白激酶 B（protein kinase B，AKT）单克隆抗体             观察其肝组织病理学形态变化，并取血进行肝功能指标


          · 1346 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 11                            中国药房  2024年第35卷第11期
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