Page 51 - 《中国药房》2024年6期

2.2.3 混合对照品溶液的制备 102.30%（n＝9），表明不同产地鼠曲草的化学成分含量
精密称取原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、1，3-O-二咖啡 存在较大差异。以生成的对照指纹图谱为对照，计算各
酰基奎尼酸、金丝桃苷、异毛蕊花糖苷、芹菜素7-O-β-D- 批次鼠曲草药材的相似度。结果显示，10批样品相似度
吡喃葡萄糖苷、槲皮素、芹菜素各 0.65、4.86、0.48、1.92、 均大于0.90，表明不同产地的鼠曲草药材化学成分一致
1.07、1.21、1.88、1.15、1.15 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲 性较好。
醇定容，制成质量浓度分别为 0.13、0.972、0.096、0.384、 11 000 7
10 000 1 2 5 6 8 9
0.214、0.242、0.376、0.23、0.23 mg/mL 的 混 合 对 照 品 9 000 3 4 S10
8 000 S9
溶液。 7 000 S8
S7
6 000
2.2.4 精密度试验 电压/mV 5 000 S6
4 000
S5
取鼠曲草供试品溶液（编号S1），按“2.2.1”项下色谱 3 000 S4
2 000 S3
条件连续进样6针，以7号峰（芹菜素7-O-β-D-吡喃葡萄 1 000 S2
0 S1
糖苷）为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
时间/min
峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间的 RSD 为
图1 10批鼠曲草药材的共有峰模式
0.01%～0.02%，相 对 峰 面 积 的 RSD 为 2.17%～2.85%
3
（n＝6），表明方法精密度良好，符合指纹图谱技术要求。 1 200
1 100
2.2.5 重复性试验 1 000
900
取鼠曲草药材（编号S1），按“2.2.2”项下方法平行制 800
700
备6份供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样分析， 电压/mV 600 7
500
以 7 号峰（芹菜素 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）为参照峰，计 400 1 6
300
算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果显示， 200 2 4 5 8 9
100
0 R
各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.02%～0.26%，相对
4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
峰面积的 RSD 为 2.35%～2.81%（n＝6），表明方法重复 时间/min
性良好。 图2 鼠曲草对照指纹图谱R
2.2.6 稳定性试验 2.3 10批鼠曲草药材的化学模式识别分析
取鼠曲草供试品溶液（编号S1），按“2.2.1”项下色谱 2.3.1 聚类分析
条件，分别在放置 0、2、4、6、8、12、24 h 时进样分析，以 7 选择欧氏距离为测度，采用组间连接法进行聚类分
号峰（芹菜素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）为参照峰，计算各 析。结果显示，10 批样品呈明显的分类趋势，当欧氏距
共有峰的相对保留时间及相对峰面积。结果显示，各共 离为 20 时，10 批样品聚为 3 类，其中 S3、S4、S6、S7、S10
有峰相对保留时间的 RSD 为 0.06%～0.26%，相对峰面 聚为一类，S2、S5、S8、S9 聚为一类，S1 聚为一类，结果
积的 RSD 为 0.88%～2.49%（n＝6），表明鼠曲草供试品 见图3。
溶液在24 h内稳定。 平方欧氏距离
0 5 10 15 20 25
2.2.7 指纹图谱的建立与相似度评价 S4
取10批鼠曲草药材，按“2.2.2”项下方法分别制备供 S10
试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样分析，记录色 S3
谱图。将10批鼠曲草HPLC数据导入《中药色谱指纹图 S6
S7
谱相似度评价系统（2012年版）》进行评价，设置S1样品 编号 S5
图谱为参照，采用平均数法，时间窗宽度设置为0.1 min， S9
经过多点校正和 Mark 峰匹配，得到 10 批鼠曲草药材的 S8
共有峰模式（图 1）及鼠曲草对照指纹图谱 R（图 2）。其 S2
中标定了 9 个共有峰（1 号峰为原儿茶酸，2 号峰为绿原 S1
图3 10批鼠曲草药材聚类分析树状图
酸，3号峰为咖啡酸，4号峰为1，3-O-二咖啡酰基奎尼酸，
5 号峰为金丝桃苷，6 号峰为异毛蕊花糖苷，7 号峰为芹 2.3.2 主成分分析
菜素 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，8 号峰为槲皮素，9 号峰为 将 10 批鼠曲草药材指纹图谱中的 9 个共有峰数据
芹菜素），以7号峰（芹菜素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷）为参 导入 SPSS 21.0 软件进行主成分分析，计算得到主成分
照峰，分别计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面 特征值、累计方差贡献率。结果显示，主成分分析共提
积。结果显示，9 个共有峰相对保留时间的 RSD 为 取 3 个特征值大于 1 的主成分，累计方差贡献率为
0.43%～1.85%（n＝9），相对峰面积的 RSD 为 53.29%～ 87.804%，表明提取的前 3 个主成分可以代表鼠曲草药

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