Page 71 - 《中国药房》2024年3期
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打损伤、关节疼痛、扁桃体炎、咽喉肿痛、腰背痛等                    [3—4] 。  2.2 供试品溶液的制备
          红凉伞中主要化学成分有三萜皂苷类、黄酮类、香豆素                               取相当于 0.2 g 生药材质量的提取物细粉，精密称
          类和酚酸类等多种成分          [5—6] ，现代药理学研究表明其具             定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定
          有抗病毒、抗肿瘤、防治心脑血管疾病及抑制乳腺癌转                           质量；超声（功率180 W，频率40 kHz）处理40 min，放冷，
          移等作用    [7—8] 。但红凉伞治疗疾病的药效物质基础尚不                   再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，收集
          明确，且关于红凉伞的化学成分研究较少。基于中药血                           续滤液。精密量取续滤液 5 mL，置于 10 mL 量瓶中，加
          清药物化学理论，中药真正发挥功效的活性成分与其所                           甲醇至刻度，摇匀，过 0.22 μm 微孔滤膜至进样杯中，供
          含的固有成分往往不同，只有从血中发现直接作用的活                           UPLC-QE-HF-MS/MS分析。
          性物质并追溯其前体化合物才能真正阐明中药发挥临                            2.3 对照品溶液的配制
          床疗效的药效物质基础 。因此，本研究采用可以高效、                              精密称取岩白菜素、朱砂根皂苷 A、丁香酸对照品
                              [9]
          快速得到目标分析物的分子离子峰和碎片离子等信息                            约10 mg分别至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，得质量浓
          的超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法                          度为 1 mg/mL 的储备液。分别精密量取上述对照品储
         （UPLC-QE-HF-MS/MS）对红凉伞的化学成分进行分                      备液各500 μL，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇定容，得
          析，同时依据中药血清药物化学理论对其入血成分进行                           混合对照品溶液。
                                                             2.4 分组、给药及取材
          分析，以期为红凉伞药效物质基础研究提供参考，为建
          立科学的用药依据和质量控制方法提供依据。                                   大鼠适应性喂养 1 周后，采用配对比较法将其随机
          1 材料                                               分为空白组和红凉伞给药组，每组6只。实验期间，空白
                                                             组大鼠自由摄食饮水，给药组大鼠灌胃“2.1”项下制备的
          1.1 主要仪器
                                                             提取物（生药质量浓度为 0.5 g/mL），给药剂量为 5 g/kg
              本研究所用主要仪器包括 Thermo Vanquish 型超高
                                                            （约等于10倍成人临床等效剂量），每天上、下午各给药
          效液相色谱仪、Thermo Q-Exactive HF/MS 四极杆串联
                                                             1次，连续3 d。第4天上午再次给药1 h后，腹腔注射2%
          高分辨质谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公司），JP2-
                                                             戊巴比妥钠（2.25 mL/kg）对大鼠进行麻醉。腹主动脉
          160型万分之一电子天平（日本Chyo公司），XS205型十
                                                             取血，静置 30 min，低温、低速离心（4 ℃，4 000 r/min，
          万 分 之 一 电 子 天 平（瑞 士 Mettler-Toledo 公 司），SB-
                                                             15 min），收集上清液，立刻冻存于－80 ℃冰箱中，供后
          600DTY 型超声波清洗器（宁波新芝生科技股份有限公
                                                             续处理分析。
          司），MTN-2800D 型氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限
                                                             2.5 血清样品处理
          公司）。
                                                                 取空白组和红凉伞给药组大鼠血清各200 µL，分别
          1.2 主要药品与试剂
                                                             加入 3 倍量甲醇，涡旋混匀，在 4 ℃下以 10 000 r/min 离
              红凉伞药材于2019年10月采集于贵州省凯里市雷
                                                             心15 min，取上清液至EP管中，以37 ℃氮气吹干。残渣
          山县雷公山，并经贵州中医药大学药学院魏升华教授鉴
                                                             加入 100 μL 甲醇复溶，涡旋 2 min，溶解，在 4 ℃下以
          定为紫金牛科紫金牛属红凉伞 A. crenata Sims var. bi‐
                                                             14 000 r/min 离心 15 min，取上清液，过 0.22 μm 微孔滤
          color（Walk）C.Y. Wu et C. Chen 的干燥根及根茎。对照
                                                             膜，即得待测血清样品。
          品 岩 白 菜 素（批 号 PS000991）、朱 砂 根 皂 苷 A（批 号            2.6 检测条件
          PS011516）、丁香酸（批号 D-019-180426）均购于成都瑞               2.6.1 色谱条件
          芬思生物科技有限公司，纯度均≥98%；甲醇、乙腈、甲                             采用 Agilent Zorbax Eclipse C18 色谱柱（100 mm×
          酸为质谱级，水为超纯水。                                       2.1 mm×1.8 μm）；流动相为乙腈（A）-0.1% 甲酸溶液
          1.3 动物
                                                            （B），梯 度 洗 脱（0～2  min，5%A；2～7  min，5%A→
              本研究所用动物为健康雄性清洁级 SD 大鼠，共 12                     30%A；7～12  min，30%A→78%A；12～14  min，78%A；
          只，体重（200±20） g，购于长沙市天勤生物技术有限公                      14～18 min，78%A→95%A）；柱温为 30 ℃；流速为 0.3
          司，动物生产许可证号为SCXK（湘）2019-0014。本研究                    mL/min；进样量为2 μL；自动进样器温度为4 ℃。
          动物实验符合贵州中医药大学实验动物伦理委员会审                            2.6.2 质谱条件
          查批准要求（批准号为20210169）。                                   采用电喷雾离子源（ESI），在正、负离子模式下检
          2 方法                                               测；加热器温度为 325 ℃；鞘气压力为 45 arb，辅助气压
          2.1 红凉伞提取物的制备                                      力为 15 arb，吹扫气压力为 1 arb；电喷雾电压为 3.5 kV；
              称取红凉伞药材 250 g，加 10 倍量水（mL/g）煎煮 2               毛细管温度为 330 ℃；S-Lens RF Level 为 55；扫描模式
          次，每次 2 h，趁热过滤，合并滤液。将滤液经旋转蒸发                        为一级全扫描（full scan，m/z 100→1 500）与数据依赖性
                                                                                 2
          仪浓缩，真空干燥备用，得率为33.90%。                              二级质谱扫描（dd-MS ，Top N＝10）；分辨率为 70 000

          中国药房  2024年第35卷第3期                                                 China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 3    · 317 ·
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