Page 78 - 《中国药房》2023年17期

2.4 秃 叶 黄 檗 果 实 非 挥 发 油 的 UPLC-Q-Orbitrap 对照品溶液，混匀，用0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。
HRMS成分分析 2.4.4 UPLC-MS分析供试品溶液的制备
2.4.1 色谱条件 精密称取秃叶黄檗果实粉末1.0 g，置于50 mL锥形
采 用 Thermo Acclaim RSLC 120 C18 色 谱 柱（100 瓶中，加入 30 mL 甲醇，超声（功率 45 kHz，频率 250 W）
mm×3 mm×2.2 μm），以 0.1% 甲酸溶液（A）-0.1% 甲酸 处理 30 min，过滤，滤液旋转蒸干，加入适量甲醇溶解
乙腈溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～5 min，5%B→ 后，置于10 mL容量瓶中并以甲醇定容，以0.22 μm微孔
8%B；5～12 min，8%B；12～13 min，8%B→10%B；13～ 滤膜过滤，即得。
17 min，10%B；17～25 min，10%B→15%B；25～28 min， 2.4.5 数据处理及结果
15%B→22%B；28～32 min，22%B→25%B；32～35 min， 将采集得到的原始数据导入 Compound Discoverer
25%B；35～42 min，25%B→28%B；42～48 min，28%B→ 3.0软件，通过其向导设置及方法模板，建立未知化合物
30%B；48～52 min，30%B→55%B；52～63 min，55%B→ 的鉴定流程，对原始数据进行峰对齐和峰提取。通过提
100%B）；流速为 0.2 mL/min；柱温为 35 ℃；进样量为 2 取得到的分子离子色谱峰、同位素峰拟合出可能的分子
μL。 式，并将二级碎片实测谱图与mzCloud网络数据库及本
2.4.2 质谱条件 地中药成分数据库 OTCML 进行匹配，对匹配结果设置
采用电喷雾离子源，在正、负离子模式下检测。喷 过滤参数为：峰面积阈值80 000，一级及二级质量偏差5
雾电压为 3.5 kV；辅助气温度为 350 ℃；辅助气流速为 ppm，匹配度分值高于80。对过滤后的离子与数据库中
10 arb；鞘气流速为 35 arb；离子传输管温度为 320 ℃。 的化合物信息及对照品进行比对，结合相关文献和在线
2
扫描模式为全扫描/数据依赖二级扫描（Full MS/dd-MS）， 数据库（PubChem）对化学成分进行进一步的分析鉴定。
一级分辨率为70 000，二级分辨率为17 500；扫描范围为 结果，通过UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术，共从秃叶黄檗
m/z 100～1 500；阶梯碰撞能量为20、40、60 eV。 果实中鉴定出69个化合物，包括酚酸类化合物16个、生
2.4.3 对照品溶液的制备 物碱类化合物13个、黄酮类化合物10个、氨基酸类化合
取甜菜碱、葫芦巴碱、熊果苷、红景天苷、秦皮甲素、 物7个、核苷类化合物5个、香豆素类化合物3个、三萜类
绿原酸、黄柏碱、槲皮素、山柰酚、延胡索乙素、小檗红 化合物3个、其他类化合物12个，其中18个化合物经过
碱、药根碱、巴马汀、小檗碱、木犀草素、吴茱萸碱、柠檬 对照品比对确认。在正、负离子检测模式下，秃叶黄檗
苦素和黄柏酮对照品各适量，置于同一容量瓶中，加入 果实供试品及混合对照品UPLC-Q-Orbitrap HRMS的总
甲醇配制成各成分质量浓度均约为 100 μg/mL 的混合 离子流图见图2，具体化合物信息见表3。
1.25×10 10 8.00×10 9

1.00×10 10
6.00×10 9
7.50×10 9
丰度 丰度 4.00×10 9
5.00×10 9
2.00×10 9
2.50×10 9

0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
时间/min 时间/min
A.秃叶黄檗果实供试品（正离子检测模式） B.秃叶黄檗果实供试品（负离子检测模式）
2.50×10 10 4.00×10 9
15
1
2.00×10 10
2 3.00×10 9 14
9
1.50×10 10 13
丰度 11 17 丰度 2.00×10 9 5 8
1.00×10 10 12 4
1 16
3 6
1.00×10 9
5.00×10 9
7 2 12 17
4 5 6 8 14 15 18 7 10 18
3 16
0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
时间/min 时间/min
C.混合对照品（正离子检测模式） D.混合对照品（负离子检测模式）
1：甜菜碱；2：葫芦巴碱；3：熊果苷；4：红景天苷；5：秦皮甲素；6：绿原酸；7：黄柏碱；8：槲皮素；9：山柰酚；10：延胡索乙素；11：小檗红碱；12：药
根碱；13：巴马汀；14：小檗碱；15：木犀草素；16：吴茱萸碱；17：柠檬苦素；18：黄柏酮。
图2 秃叶黄檗果实与混合对照品UPLC-Q-Orbitrap HRMS的总离子流图

· 2116 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 中国药房 2023年第34卷第17期