Page 77 - 《中国药房》2023年17期

2.1.2 秃叶黄檗果实挥发油试药 2.3 秃叶黄檗果实挥发油的GC-MS成分分析
称取秃叶黄檗果实粉末（过三号筛）100 g，加入 10 2.3.1 色谱条件
倍体积的水，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油得 色谱柱为 Agilent HP-5MS 柱（30 m×250 μm×0.25
率为1.43%，临用时用2%聚山梨酯80稀释至给药浓度。 μm）；采用程序升温：初始温度 50 ℃，保持 2 min，以
2.2 秃叶黄檗果实水煎液和挥发油的止咳祛痰活性考察 4 ℃/min 升 温 至 280 ℃ ，保 持 2 min；进 样 口 温 度 为
2.2.1 止咳活性考察 280 ℃；载气为氦气，流速为1.0 mL/min；分流比为20∶1；
采用氨水引咳实验进行考察，具体操作参照文献 进样量为1 μL。
[9]。取小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组：正常对照组 2.3.2 质谱条件
（生理盐水），右美沙芬组（阳性对照氢溴酸右美沙芬 电离方法为电子轰击电离（electron ionization，EI）；
片，15 mg/kg），秃叶黄檗果实水煎液高、低剂量组（后文 电子能量为70 eV；离子源温度为230 ℃；质量扫描范围
简称为“水煎液高、低剂量组”，给药剂量以生药量计分 为20～450；质谱检索标准库为NIST14。
别为 12、3 g/kg），秃叶黄檗果实挥发油高、低剂量组（后
2.3.3 GC-MS分析供试品溶液的制备
文简称为“挥发油高、低剂量组”，给药剂量以挥发油量
取秃叶黄檗果实打粉，过三号筛，精密称取粉末约100
计分别为0.8、0.2 g/kg），每组10只。灌胃相应药物/生理
g，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，得淡黄色挥发油液体
盐水，每天1次，连续7 d。末次灌胃后0.5 h，将小鼠放入
约 1.5 mL。加入无水硫酸钠约 0.5 g，静置过夜，以除去
1 000 mL烧杯中，再迅速放入注有0.4 mL浓氨水的棉球
水分。取挥发油约1.0 mL置于10 mL容量瓶中，用无水
刺激小鼠，以小鼠腹肌强烈收缩且张嘴为咳嗽动作指
乙醚定容，以0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。
标，记录其咳嗽潜伏期和2 min内咳嗽次数。采用SPSS
2.3.4 数据处理及结果分析
26.0软件对数据进行统计分析。实验结果以x±s表示，
将所得质谱裂解数据信息与 NIST14 数据库匹配，
多组间比较采用单因素方差分析，进一步的组间两两比
得到匹配度≥90% 的化合物共 38 个，总离子流图见图
较采用 LSD-t 检验；检验水准 α＝0.05。结果显示，与正
1。其中，相对百分含量＞1%的主要化合物有8个，分别
常对照组比较，各给药组小鼠的咳嗽潜伏期均显著延长
为 α-蒎烯（1.27%）、月桂烯（64.08%）、石竹烯（1.07%）、
（P＜0.05 或 P＜0.01），右美沙芬组、水煎液高剂量组和
germacrene D（2.77%）、isospathulenol（1.08%）、α-cadinol
挥发油高剂量组小鼠2 min内咳嗽次数均显著减少（P＜
（1.32%）、4（15），5，10（14）-大根香叶三烯-1-醇（1.24%）、
0.05或P＜0.01）。结果见表1。
金合欢醇（1.29%），具体化合物的匹配度与相对百分含
表1 各组小鼠的咳嗽潜伏期、2 min内咳嗽次数及气管
量信息见表2。
中酚红分泌量测定结果（x±s，n＝10）
组别 咳嗽潜伏期/s 2 min内咳嗽次数/次 酚红分泌量/（μg/mL）
正常对照组 45.20±5.213 44.30±1.862 0.91±0.079
右美沙芬组/氯化铵组 69.90±4.375 a 31.40±1.368 a 1.36±0.070 a 4×10 7
水煎液高剂量组 68.90±4.100 a 35.10±0.936 b 1.45±0.121 a
水煎液低剂量组 57.80±3.593 b 42.50±5.636 1.22±0.119 b
挥发油高剂量组 68.70±3.887 a 34.20±3.010 b 1.19±0.037 b
挥发油低剂量组 55.00±5.108 b 36.80±2.752 1.12±0.058 丰度 2×10 7
a：与正常对照组比较，P＜0.01；b：与正常对照组比较，P＜0.05。
2.2.2 祛痰活性考察
采用药物祛痰小鼠实验进行考察。动物选取及给
药方式同“2.2.1”项，阳性对照药变更为氯化铵（1 g/kg）。 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
末次给药 0.5 h 后，各组小鼠按 1 g/kg 腹腔注射 5% 酚红 时间/min
溶液，0.5 h后颈椎脱臼处死小鼠。取下气管放入2 mL生 图1 秃叶黄檗果实挥发油的GC-MS总离子流图
理盐水中，加 1 mol/L NaOH 溶液 0.2 mL，以 3 000 r/min 表2 秃叶黄檗果实主要挥发油成分及其相对百分含量
离心15 min，取上清液于酶标仪546 nm波长处测定光密 保留时间/ 相对百分
编号 分子量 名称 分子式 匹配度/%
度（OD）值。根据标准曲线 Y＝0.059 6X－0.028 3（R ＝ min 含量/%
2
1 6.229 136.234 α-蒎烯 C 10H 16 1.27 96
0.996 9）（式中 X 为酚红质量浓度，Y 为 OD 值）计算气管
2 8.431 136.234 月桂烯 C 10H 16 64.08 97
中酚红分泌量。数据结果按“2.2.1”项下方法进行统计 3 22.502 204.351 石竹烯 C 15H 24 1.07 99
学分析。结果显示，与正常对照组比较，氯化铵组和水 4 24.468 204.351 germacrene D C 15H 24 2.77 99
5 28.930 220.350 isospathulenol C 15H 24O 1.08 99
煎液高剂量组、水煎液低剂量组、挥发油高剂量组小鼠
6 29.618 222.366 α-cadinol C 15H 26O 1.32 96
气管中的酚红分泌量均显著增加（P＜0.05或P＜0.01）。 7 30.525 220.350 4（15），5，10（14）-大根香叶三烯-1-醇 C 15H 24O 1.24 99
结果见表1。 8 31.474 222.366 金合欢醇 C 15H 26O 1.29 97

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