Page 73 - 《中国药房》2023年15期
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模，消毒，常规护理。于造模后第4、7天时，以上述相同 显色时间，以棕黄色为阳性染色。当出现阳性染色时，
方法再次注射木瓜蛋白酶与 L-半胱氨酸的混合液进行 以自来水冲洗切片终止显色；将终止显色的切片放入苏
[7]
加强 。随后观察大鼠关节肿胀程度（以关节直径计）评 木素染色液中复染，并进行中性树胶封片，然后置于显
估造模进展，并在造模后第21天采用核磁共振技术观察 微镜下观察相关蛋白的表达情况。
大鼠软骨、半月板损伤程度以及关节腔积液等指标。当 2.8 统计学方法
大鼠关节可见软骨、半月板磨损以及关节腔积液则表明 采用 Graphpad Prism 7 软件进行数据统计，数据以
造模成功 。 x±s表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两
[8]
造模成功后，扶他林组（200 mg/只）、伤科消炎膏组 比较采用Tukey检验。检验水准α＝0.05。
（500 mg/只，含伤科消炎流浸膏 50 mg）、伤科消炎水凝 3 结果
胶贴膏组（200 mg/只，含伤科消炎流浸膏50 mg）大鼠分 3.1 伤科消炎水凝胶贴膏对 OA 模型大鼠膝关节形态
别在右膝涂抹相应药物，给药剂量依据临床等效剂量换 的影响
算而得，给药面积均为 1 cm×2 cm，给药区表面用聚乙 给药 14 d 后，空白组大鼠膝关节完全正常，模型组
烯膜覆盖，每天换药1次，连续14 d。空白组与模型组大 大鼠膝关节严重肿胀，各给药组大鼠膝关节肿胀程度均
鼠右膝相同部位用聚乙烯膜覆盖，但不给药。 较模型组有不同程度的降低，结果见图 1。模型组大鼠
2.3 大鼠膝关节形态的观察
膝关节成像可见明显关节腔积液，外侧半月板前角呈团
造模完成后，分别在给药0、4、7、11、14 d时，采用游
片状磨损；伤科消炎膏组大鼠膝关节成像可见部分关节
标卡尺测量大鼠右膝关节直径，进行膝关节肿胀程度评
腔积液，外侧半月板前后角下缘呈线状、点状损伤；扶他
价。末次给药结束后，使用小动物磁共振谱仪以 R2 模
林组和伤科消炎水凝胶贴膏组大鼠虽可见关节腔少量
式扫描大鼠右膝关节，观察其膝关节磁共振成像特征。
积液，但半月板形态完全正常，结果见图2。
2.4 样本采集
13
末次给药后，对所有大鼠进行眼眶采血，于室温放 12
空白组
置分层后，以 4 000 r/min 离心 10 min，取上层血清于 11 模型组
－20 ℃保存备用。取血完成后，解剖大鼠，收集肝、肾、 肿胀程度/cm 10 扶他林组
伤科消炎水凝胶贴膏组
伤科消炎膏组
右膝关节组织备用。 9
2.5 大鼠血清中炎症因子水平的检测 8
取“2.4”项下血清样品，按试剂盒说明书方法操作， 7 0 4 7 11 14
时间/d
测定血清中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平。
图1 各组大鼠膝关节肿胀程度比较结果（x±s，n＝8）
2.6 大鼠膝关节组织的病理形态学观察
取 3 只大鼠的膝关节组织置于恒温摇床脱钙 60 d， 3.2 伤科消炎水凝胶贴膏对 OA 模型大鼠血清中炎症
经脱水浸蜡后进行包埋、切片（4 μm）、烤片；取部分石蜡 因子水平的影响
切片（剩余部分进行免疫组化实验）脱蜡至水，然后进行 与空白组比较，模型组大鼠血清中 IL-1β、IL-6、IL-
苏木精-伊红染色和番红-固绿染色，再以中性树胶封片， 18、TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，
采用显微镜进行观察，并进行组织病理学评分及软骨 各给药组大鼠血清中上述炎症因子水平均在一定程度
[9]
Mankin评分 。 上有所降低，其中，伤科消炎水凝胶贴膏组大鼠血清中
2.7 大鼠膝关节组织中 IL-1β、IL-6、TNF-α 蛋白表达 IL-18、TNF-α 水平均显著降低（P＜0.05）。与伤科消炎
的检测 膏比较，伤科消炎水凝胶贴膏组大鼠血清中上述指标水
采用免疫组化法进行检测。将“2.6”项下剩余的膝 平均降低，但差异无统计学意义。结果见表1。
关节组织石蜡切片脱蜡至水，然后进行抗原修复、血清 3.3 伤科消炎水凝胶贴膏对 OA 模型大鼠膝关节组织
封闭，加入IL-1β、IL-6、TNF-α一抗（稀释比例分别为1∶ 的病理形态学影响
500、1∶200、1∶200）于 4 ℃孵育过夜；以磷酸盐缓冲液 与空白组大鼠比较，模型组大鼠膝关节组织具有软
（PBS，pH7.4）洗涤后，加入相应二抗，室温孵育 2 h；以 骨着色减弱、滑膜细胞增生与淋巴细胞浸润等特征，并
PBS 洗涤后，置于 DAB 显色液中显色，在显微镜下控制 可观察到损伤已侵及松质骨；伤科消炎膏、扶他林以及
中国药房 2023年第34卷第15期 China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 15 · 1855 ·
