Page 67 - 《中国药房》2023年11期
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2.6 半夏地上和地下部分中天门冬氨酸的含量测定                           止咳糖浆和0.9%氯化钠溶液。灌胃体积均为0.5 mL/kg，
          2.6.1 溶液制备 （1）供试品溶液：分别称取半夏地上                       每天给药1次，连续给药5 d。末次给药1 h后，参照文献
          和地下部分粉末（过四号筛）各约 0.5 g，精密称定，置于                      [13]方法并作适当改进后进行浓氨水引咳实验：将大鼠

          20 mL气相顶空瓶中，精密加入5 mol/L盐酸溶液10 mL                   置于 500 mL 玻璃钟罩内，通过空气压缩机连接玻璃喷
         （含草酸 0.10 g、巯基乙醇 0.2 mL），通入氮气后封口，然                  雾头，以 400 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa）恒压将氨水
          后置于110 ℃烘箱内水解24 h，取出冷却，打开顶空瓶，                     （含 25%～28% 氢氧化铵）均匀地喷入钟罩内，喷雾 15 s
          滤过，收集滤液。精密量取2 mL滤液蒸干，残留物用水                         后，立即关闭雾化器，记录大鼠咳嗽潜伏期（从吸入氨气
          溶解，然后再次蒸干，反复操作3次。蒸干后残渣用适量                          开始至出现咳嗽的时间）和3 min内咳嗽次数（从第1次
          水溶解并定容至25 mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤，取续                     咳嗽开始计时，3 min之内的咳嗽次数）。咳嗽的标准表
                                                                                                          [14]
          滤液，即得。（2）对照品溶液：取天门冬氨酸对照品适量                         现为大鼠腹肌收缩，同时张大嘴，有时可有咳嗽声音 。
          至棕色量瓶中，加水制成质量浓度为 1 020.30 µg/mL                    采用 SPSS 25.0 软件对数据进行统计分析；实验数据以
                                                             -
          的对照品贮备液。取对照品贮备液，用流动相稀释                             x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两
          成 质 量 浓度分别为 10.20、20.40、40.80、80.16、160.32、        比较采用LSD-t检验；检验水准α＝0.05。结果见表1。
          320.64 µg/mL的系列溶液，经0.22 μm微孔滤膜过滤，取                 表1 各组大鼠咳嗽潜伏期和 3 min 内咳嗽次数的测定
          滤液，即得。                                                  结果（x±s，n＝10）
                                                              组别                    咳嗽潜伏期/s     3 min内咳嗽次数/次
          2.6.2 检测方法及方法学验证 采用 UPLC-MS/MS 法
                                                              模型对照组                 40.5±3.6 a     15.2±2.1 a
          进行测定。色谱条件为：采用 Agilent T3 色谱柱（100                    阳性对照组                 180.4±16.5 b   3.6±1.6 b
          mm×2.1 mm，1.8 μm），以流动相为甲醇-0.15% 乙酸溶                 半夏地上部分组               129.3±16.9 c   5.3±2.1 b
                                                              半夏地下部分组               186.1±10.4 b   3.9±1.3 b
          液（7∶93，V/V）为 流 动 相 进 行 等 度 洗 脱 ，流 速 为 0.5             注：相同指标中两组间字母不同，表示组间比较差异具有统计学
          mL/min，柱温为 25 ℃，进样量为 2 μL。质谱条件为：采                  意义（P＜0.05）；反之则表示两组间差异无统计学意义（P＞0.05）
          用电喷雾离子源在正离子模式下检测，扫描模式为多反                               与模型对照组比较，各给药组大鼠的咳嗽潜伏期均

          应监测（MRM）模式；气帘气压力为 35 psi，雾化气压力                     显著延长（P＜0.05），3 min内咳嗽次数均显著减少（P＜
          为55 psi，雾化温度为550 ℃；辅助气压力为55 psi，碰撞                 0.05）；虽然阳性对照组和半夏地下部分组小鼠的咳嗽潜
          气氩气压力为 9 psi；喷雾电压为 5 500 V，去簇电压为                   伏期均显著长于地上部分（P＜0.05），但这 3 组大鼠的 3
          30 V，碰撞电压为 20 V；检测离子对质荷比（m/z）为                     min内咳嗽次数差异无统计学意义（P＞0.05），这表明半
          133.100→88.060。方法学考察结果显示，方法专属性良                    夏地上部分亦具有一定镇咳效果。
          好，待测成分峰与相邻峰间的分离度大于1.5，杂质峰不                         3 讨论
          干扰测定；天门冬氨酸的线性范围为 10.20～320.64                          本研究选用薄层色谱法对主要活性成分进行了定
          μg/mL，精密度、稳定性（室温24 h）、重复性试验的RSD                    性比对，发现半夏地上部分与半夏对照药材、半夏地下

          均小于1.5%（n＝6），平均加样回收率为98.54%（RSD为                   部分均具有相同的主斑点。精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮
          1.3%，n＝6）。方法学验证结果表明，所建方法可用于天                       氨酸是2020年版《中国药典》（一部）中半夏药材鉴别项
                                                                         [15]
          门冬氨酸的含量检测。                                         下的检查项目 ，具有镇吐、抗早孕作用 。薄层色谱鉴
                                                                                               [16]
          2.6.3 含量测定及结果分析 采用建立的 UPLC-MS/                     别结果发现，半夏地上部分与地下部分中上述4种氨基
          MS 法测定半夏地上和地下部分中天门冬氨酸含量，采                          酸的组成相似。挥发油为半夏的主要成分，可用于治疗
          用标准曲线法计算含量。结果显示，半夏地上部分中天                           因化疗及放射治疗引起的白细胞减少 。本研究采用
                                                                                               [16]
          门冬氨酸含量为3.7 mg/g，地下部分为6.2 mg/g。                     GC 法对半夏挥发油成分组成进行分析发现，半夏地上
          2.7 半夏地上和地下部分的镇咳作用研究                               部分和地下部分具有相似的挥发油组成。
              取大鼠 40 只，按照完全随机法分为模型对照组                            有机酸类和黄酮类成分是半夏的主要药理活性物

         （0.9% 氯化钠溶液）、半夏地下部分组、半夏地上部分组                        质 [6―7] 。本研究采用 HPLC 法对有机酸类成分琥珀酸和
          及阳性对照组（杏荷止咳糖浆），每组 10 只，雌雄各半。                       黄酮类成分槲皮素、山柰酚、异鼠李素进行定量分析，结
          半夏地上、地下部分组大鼠均按 3 g/kg（以生药量计）进                      果显示，与半夏地下部分比较，半夏地上部分中琥珀酸
          行灌胃给药 ，阳性对照组和模型对照组分别灌胃杏荷                           含量高了0.15%，槲皮素含量高了0.15%，山柰酚含量高
                    [12]

          中国药房  2023年第34卷第11期                                              China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 11    · 1341 ·
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