Page 66 - 《中国药房》2023年11期

0.25 μm，30.0 m）；载气为高纯氦气（99.999%）；流速为 酸调节 pH 至 2.5）（5∶95，V/V）为流动相进行等度洗脱，
1.0 mL/min；气化室温度为 250 ℃；升温程序从 40 ℃开 流速为 0.6 mL/min，检测波长为 210 nm，柱温为 20 ℃，
始，以10 ℃/min的速率升至250 ℃，保持10 min；分流比 进样量为 10 μL。方法学考察结果显示，方法专属性较
为40∶1；进样量为1.0 μL。 好，待测成分峰与相邻峰间的分离度大于1.5；琥珀酸检

2.3.3 GC 图相似度分析 取半夏地上和地下部分所 测的线性范围为 12.48～124.80 μg/mL，重复性、稳定性
提挥发油，分别按“2.3.2”项下色谱条件进样分析，记录 （室温 24 h）、精密度试验的 RSD 均小于 1.5%（n＝6），平
色谱图。采用《中药指纹图谱相似度评价系统（2012A 均加样回收率为 101.09%（RSD＝1.0%，n＝6）。方法学
版）》软件对色谱图进行分析，将半夏地下部分挥发油 验证结果表明，所建方法可用于琥珀酸的含量检测。
GC图设为标准图谱，以半夏地上部分挥发油GC图为待 2.4.3 含量测定及结果分析 采用建立的 HPLC 法对
检测样品，分别将标准图谱和待测图谱中的色谱峰全部 半夏地上和地下部分中琥珀酸含量进行测定，采用外标
选中进行相似度分析。结果显示，以半夏地下部分 GC 法进行计算。结果显示，半夏地上部分中琥珀酸含量为
图为参考，共找到 15 个共有峰，两者图谱的相似度为 0.69%，地下部分为0.54%。
0.767，详见图4。 2.5 半夏地上和地下部分中黄酮类化合物的含量测定
110
100 2.5.1 溶液制备 （1）供试品溶液：分别取半夏地上和
90
80 地下部分粉末约 1 g，精密称定，置于索氏提取器中，加
相对强度/% 60 乙醚适量，加热回流至无色，放冷，弃去乙醚；再加甲醇
70
50
90 mL，加热回流至无色，转移至100 mL容量瓶中，用少
40
30
20 量甲醇洗涤，洗液并入同一容量瓶中，加甲醇至刻度，摇
10 匀，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得。（2）对照品溶液：分
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 别取槲皮素、山柰酚、异鼠李素对照品适量，精密称定，
t/min
A.半夏地上部分 分别加甲醇稀释成每1 mL含槲皮素、山柰酚、异鼠李素
110 50 μg 的混合对照品溶液，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，取
100
90 滤液，即得。
80 2.5.2 检测方法及方法学考察 采用 HPLC 法进行检
70
相对强度/% 60 测。检测条件如下：色谱柱为 XBridge C18柱（250 mm×
50
40
30 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.4% 磷酸溶液 （55∶45，
20
10 V/V）；流速为0.8 mL/min；柱温为25 ℃；检测波长为360
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 nm；进样量为 10 μL。方法学考察结果显示，方法专属
t/min
B.半夏地下部分 性较好，待测成分峰与相邻峰间的分离度大于1.5；槲皮
图4 半夏地上和地下部分挥发油的GC图 素、山柰酚、异鼠李素的线性范围分别为 3.23～211.68、
2.4 半夏地上和地下部分中琥珀酸的含量测定 12.76～204.20、12.61～201.68 μg/mL，精密度、稳定性
2.4.1 溶液制备 （1）供试品溶液：分别将挥发油测定 （室温24 h）、重复性试验中3种成分峰面积/含量的RSD
实验中经提取后的半夏地上和地下部分药渣取出，烘干 均小于2.0%（n＝6），上述3种成分的平均加样回收率分
至恒重。取烘干后药渣约 0.5 g，加 30 mL 水，加热回流 别为 98.79%、99.87%、99.31%（RSD 分别为 1.7%、1.2%、
提取 2 h，室温过滤，用水洗涤滤渣 3 次，合并滤液，转移 1.4%，n＝6）。方法学验证结果表明，所建方法可用于 3
至50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，经0.45 μm微孔滤 种黄酮类化合物的含量检测。

膜过滤，即得。（2）对照品溶液：取琥珀酸对照品适量，精 2.5.3 含量测定及结果分析 采用建立的 HPLC 法对
密称定，分别加水定量稀释成每1 mL含30 μg琥珀酸的 半夏地上和地下部分中黄酮类化合物——槲皮素、山柰
溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。 酚、异鼠李素进行测定，以外标法计算含量。结果显示，
2.4.2 检测方法及方法学验证 采用 HPLC 法进行测 半夏地上部分中槲皮素、山柰酚、异鼠李素的含量分别
定。检测条件如下：色谱柱为 XBridge C18柱（250 mm× 为0.69%、0.47%、0.32%，地下部分分别为0.54%、0.38%、
4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液（用磷 0.29%。

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