Page 35 - 《中国药房》2023年7期
P. 35

（UHPLC-Orbitrap HRMS）具有高灵敏度、高分辨率以及                  tional  Chinese  medicine  systems  pharmacology  database
          快速扫描等优点，对丰度较低、复杂性较高、难分析样品                          and  analysis  platform（TCMSP），网 址 为 http：//tcmspw.
          的结构分析得较为透彻，定量较为准确                [4―5] 。因此，本研      com/tcmsp.php]进行匹配    [8―9] ，对各化学成分进行药材
          究采用 UHPLC-Orbitrap HRMS 技术对 CTOL 的化学成              归属。
          分进行分析，为其后期药效物质基础研究与二次开发奠                           3 结果
          定基础。                                               3.1 CTOL的化学成分分析及药材归属结果
          1 材料                                                   从 CTOL 中共鉴定分析出 53 个化学成分，包括 24
          1.1 主要仪器与软件                                        个黄酮类化合物、8个醌类化合物、5个苯丙素类化合物、
              Vanquish 液相色谱仪、Orbitrap Fusion 超高分辨三           4 个糖和苷类化合物、5 个有机酸类化合物、3 个氨基酸
          合一质谱仪以及定性分析软件Compound Discover 3.3、                类化合物、1 个生物碱类化合物、1 个酚类化合物和 2 个
          Xcalibur  qual  browser  4.3 均 购 自 美 国 Thermo  Fisher     其他类化合物。53个化合物中有12个来源于丹参，9个
          Scientific公司；Centrifuge 5810 R型离心机购自德国Ep‐          来源于枳实，7个来源于大黄，4个来源于当归，1个来源
          pendorf公司。                                         于厚朴，16个来源于甘草，4个来源于多味药材。样品检
          1.2 主要药品与试剂                                        测的总离子流图见图 1，成分鉴定及药材归属情况
              CTOL 由南方医科大学南方医院药学部提供（批号                       见表1。
          20220201，规格 10 mL/瓶）；质谱级甲酸、甲酸铵和乙腈                    100
                                                                95
          均购自美国Thermo Fisher Scientific公司。                      90
                                                                85
          2 方法                                                  80
                                                                75
          2.1 检测样品制备                                            70
                                                                65
              取 CTOL 200 μL，加入 2 500 μL 乙腈，涡旋混匀 1               60
                                                                55
          min 后以 14 000 r/min 离心 10 min，取上清，即得检测              Relative Abundance/%  50
                                                                45
          样品。                                                   40
                                                                35
                                                                30
          2.2 检测条件                                              25
                                                                20
          2.2.1  色 谱 条 件  采 用 Hypersil  Gold（100  mm×2.1        15
                                                                10
          mm×1.9 μm）色谱柱，以 0.1% 甲酸（含 5 mmol/L 甲酸                 5 0
                                                                 0            2           4          6             8        10           12       14          16          18          20          22         24
          铵）（A）-乙腈（B）作为流动相进行梯度洗脱（0～1 min，
                                                                                     t/min
                                                                                +
          5%B；1～16  min，5%B→50%B；16～21  min，50%B→                            A. ESI 模式下样品的总离子流图
          100%B；21～25 min，100%B）；流速为 0.3 mL/min；柱温             100
                                                                95
          为40 ℃；进样量为5 μL。                                       90
                                                                85
          2.2.2 质谱条件 采用电喷雾离子源（ESI），在正、负离                        80
                                                                75
                                                                70
          子检测模式下检测，喷雾电压为3.5 kV（+）/3.0 kV（－）；                    65
          离子传输管温度为320 ℃；辅助气加热温度为350 ℃；鞘                       Relative Abundance/%  60
                                                                55
                                                                50
          气和辅助气均为高纯氮气（纯度＞99.99%），鞘气为 40                         45
                                                                40
          arb，辅助气为 10 arb；检测方式为 Full MS/dd-MS ，Full             35
                                                    2
                                                                30
          MS分辨率为60 000，dd-MS 分辨率为15 000；扫描范围                    25
                                 2
                                                                20
          为质荷比（m/z）100～1 000    [6―7] 。                         15
                                                                10
                                                                5
          2.3 CTOL中化学成分归属                                       0
                                                                 0            2           4          6             8        10           12       14          16          18          20          22         24
              将“2.1”项下检测样品经液相色谱分离后进行质谱                                               t/min
                                                                             B. ESI 模式下样品的总离子流图
                                                                                －
          检测，将检测结果导入Xcalibur qual browser 4.3和Com‐
                                                                图1 两种离子检测模式下CTOL的总离子流图
          pound Discover 3.3软件，以高分辨质谱采集得到的一级
          和二级精确质量数作为未知化合物鉴定最主要的信息，                           3.2 化合物的裂解途径解析
          按照美国 Thermo Fisher Scientific 公司的质谱库以及网                鉴于本研究的目的是在明确 CTOL 化学成分的同
          络数据库 mzCloud、mzVault 和 Chemspider 等对未知化            时为后续药效物质基础研究提供参考，故本文选取组方
          合物进行鉴定。通过准确拟合出各未知化合物的化学                            中6味药材中具有代表性的成分为例进行化合物裂解途
          式，并通过同中药系统药理学数据库与分析平台[tradi‐                       径解析。
          中国药房  2023年第34卷第7期                                                 China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 7    · 797 ·
   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39   40