Page 30 - 《中国药房》2022年12期
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表1 5批条芩和5批枯芩药材样品的来源信息                           HPLC叠加指纹图谱及对照指纹图谱（R）。结果显示，5
         药材   编号    产地        购买/采集时间     来源                批条芩和5批枯芩饮片共有15个共有峰，详见图1。
         枯芩   K1    河北承德      2021年6月     安徽亳州药材市场
                                                              3 000               5
         枯芩   K2    山西运城      2021年6月     安徽亳州药材市场
         枯芩   K3    内蒙古赤峰     2021年6月     安徽亳州药材市场            2 500                   9  11  13 14
         枯芩   K4    内蒙古赤峰     2021年6月     磐安县经方集中药材有限公司       2 000       1 2 34    6 7 8  10  12  15
         枯芩   K5    陕西商洛（自采）  2020年10月    陕西商洛农户             U/mV  1 500
         条芩   T12   河北承德      2021年3月     河北汉草堂药业有限公司
         条芩   T13   陕西榆林      2021年3月     安国润德药业有限公司          1 000
         条芩   T14   山东莱芜（自采）  2020年9月     莱芜紫光生态园有限公司          500
         条芩   T15   山东日照      2020年6月     山东宏济堂饮片厂              0
         条芩   T16   陕西渭南      2021年3月     济南漱玉平民大药房               0   10   20  30  40  50   60  70  80  90
                                                                                     t/min
        入 10 倍量的 70％乙醇，称定质量，加热回流提取 2 h，放
                                                            图 1 5 批条芩和 5 批枯芩的 HPLC 叠加指纹图谱及对
        冷，再次称定质量，用70％乙醇补足减失的质量，经0.45                             照指纹图谱
        μm微孔滤膜，滤过，即得。
        2.1.2  色谱条件      以 Symmetry C18 （250 mm×4.6 mm，     2.1.7  相似度评价      以对照指纹图谱（R）为参照，采用
                                    ®
        5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动                    《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》对 5 批
        相进行梯度洗脱（0～15 min，10％A→20％A；15～36                    条芩和 5 批枯芩的指纹图谱进行相似度评价。结果显
        min，20％A→25％A；36～50 min，25％A→38％A；50～               示，5 批条芩和 5 批枯芩指纹图谱与对照图谱的相似度
        55 min，38％A→45％A；55～65 min，45％A→65％A；               均大于 0.990，表明指纹图谱暂无法区分条芩与枯芩。
        65～75 min，65％A→80％A；75～80 min，80％A；80～              结果见表2。
        86 min，80％A→10％A；86～91 min，10％A）；流速为                     表2 5批条芩和5批枯芩的相似度评价结果
        1.0 mL/min；检测波长为280 nm；柱温为25 ℃；进样量为                  编号  K1  K2  K3  K4   K5  T12  T13  T14  T15  T16  R
                                                             K1  1.000  0.999  0.997  0.999  0.997  0.997  0.998  0.999  0.998  0.998 0.999
        5 μL。
                                                             K2  0.999  1.000  0.995  0.999  0.999  0.998  0.999  0.999  0.999  0.999 1.000
        2.1.3  精密度试验       取“2.1.1”项下供试品溶液（编号                K3  0.997  0.995  1.000  0.998  0.992  0.989  0.991  0.992  0.991  0.992 0.995
        K1），按“2.1.2”项下色谱条件连续进样测定 6 次，以峰 5                    K4  0.999  0.999  0.998  1.000  0.997  0.996  0.997  0.997  0.997  0.997 0.999
        为参照峰（由于峰5的保留时间适中、分离度良好、峰面                            K5  0.997  0.999  0.992  0.997  1.000  0.998  0.998  0.997  0.998  0.999 0.999
                                                             T12  0.997  0.998  0.989  0.996  0.998  1.000  1.000  0.999  1.000  1.000 0.999
        积相对较大，故以其为参照峰），计算各共有峰的相对保
                                                             T13  0.998  0.999  0.991  0.997  0.998  1.000  1.000  0.999  1.000  1.000 0.999
        留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时                             T14  0.999  0.999  0.992  0.997  0.997  0.999  0.999  1.000  0.999  0.999 0.999
        间的 RSD 为 0.14％～0.58％（n＝6），相对峰面积的 RSD                 T15  0.998  0.999  0.991  0.997  0.998  1.000  1.000  0.999  1.000  1.000 1.000
        为0.46％～3.21％（n＝6），表明方法精密度良好。                         T16  0.998  0.999  0.992  0.997  0.999  1.000  1.000  0.999  1.000  1.000 1.000
                                                             R   0.999  1.000  0.995  0.999  0.999  0.999  0.999  0.999  1.000  1.000 1.000
        2.1.4  稳定性试验       取“2.1.1”项下供试品溶液（编号
                                                            2.2  主成分分析
        K1），分别于室温下放置0、3、6、9、15、24 h时按“2.1.2”项
        下色谱条件进样测定，以峰5为参照峰，计算各共有峰的                               以 15 个共有峰的峰面积为变量，采用 SIMCA 14.1
                                                            软 件 进 行 主 成 分 分 析（principal component analysis，
        相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对
                                                                                                         2
        保留时间的 RSD 为 0.17％～1.14％（n＝6），相对峰面积                  PCA）。结果显示，所建PCA模型的解释能力参数（R X）
                                                                                   2
        的 RSD 为 1.23％～4.66％（n＝6），表明供试品溶液于室                  为0.962，预测能力参数（Q ）为0.613，均大于0.5，表明该
                                                                        [12]
        温下放置24 h内稳定性良好。                                     模型拟合良好 。条芩与枯芩分别位于PCA得分图（图
        2.1.5  重复性试验       精密称取饮片样品（编号 K1）粉                 2）的两侧，其中条芩的聚集程度较高，枯芩则较分散，提
        末，共 6 份，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再按                      示该法可区分条芩与枯芩。载荷图中，变量离原点越
                                                                                             [13]
       “2.1.2”项下色谱条件进样测定，以峰5为参照峰，计算各                        远，表示其对主成分的影响权重越大 。由共有峰的
        共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共                            PCA 载荷图（图 3）可知，主成分 1 的主要信息来自于峰
        有峰相对保留时间的 RSD 为 0.14％～0.64％（n＝6），相                  1、3～4、6、10～15，主成分 2 的主要信息来自于峰 2、5、
        对峰面积的 RSD 为 0.67％～3.76％（n＝6），表明方法重                  7～9，其中对主成分1影响权重较大的变量为峰12、14、
        复性良好。                                               15，对主成分2影响权重较大的变量为峰2、7。
        2.1.6  指纹图谱的建立         分别取 5 批条芩、5 批枯芩饮             2.3 正交偏最小二乘法-判别分析
        片样品粉末，按“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，再按                            以 15 个共有峰的峰面积为变量，采用 SIMCA 14.1
       “2.1.2”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将色谱数                         软件进行正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal par-
        据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》，                        tial least-squares discrimination analysis，OPLS-DA）。变
        以色谱峰分离度好、信号强度相对较高的 K1 样品为参                          量重要性投影（variable importance in projection，VIP）是
        照，经多点校正后，采用中位数法生成条芩和枯芩的                             评价变量对分类贡献的常用指标，VIP 值＞1 表示该变


        ·1432 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 12                                 中国药房    2022年第33卷第12期
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