Page 51 - 《中国药房》2022年4期

2.4 半枝莲标准汤剂HPLC指纹图谱的建立 8
2.4.1 色 谱 条 件 以 ZORBAX Eclipse XDB-C18 （250
213.43
mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以 0.1％冰醋酸溶液为流 16
11
7 10 12 14 17 18
动相（A）、甲醇-乙腈混合溶液（8∶2，V/V）为流动相（B）进 182.27 1 2 3 45 6 9 13 15
R S16
行 梯 度 洗 脱（0～20 min，10％B→28％B；20～30 min， mAU S15
S14
S13
S12
S11
28％B→35％B；30～40 min，35％B→40％B；40～50 min， 91.11 S10
S9
S8
S7
S6
40％B→50％B；50～60 min，50％B→70％B）；检测波长为 S5 S4 S3
－0.05 S2 S1
335 nm；流速为1 mL/min；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。 0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.00
2.4.2 供试品溶液的制备 取“2.1”项下半枝莲标准汤 t/min
图3 16批半枝莲标准汤剂的HPLC叠加指纹图谱
剂，滤过，精密移取滤液10 mL，置于25 mL量瓶中，加水
稀释至刻度，摇匀，精密移取 5 mL，置于 10 mL 量瓶中， 8
加甲醇稀释至刻度，混匀，以 12 000 r/min 离心 10 min，
75.00
经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.4.3 混合对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷、芹 50.00
菜素、野黄芩素、木犀草素对照品适量，置于 100 mL 量 mAU 14
11
25.00 10 12
瓶中，加60％甲醇溶解并定容，混匀，制成上述成分质量
6 9 15 16 17 18
浓度分别为 77.5、7.5、8.6、30.0 μg/mL 的混合对照品 1 2 3 4 5 7 13
0
溶液。 0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.00
t/min
2.4.4 精密度试验 取“2.4.2”项下供试品溶液（编号 图4 半枝莲标准汤剂的对照指纹图谱
S1），按“2.4.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录色
2.4.7 共有峰指认 取“2.4.3”项下混合对照品溶液，按
谱图。以野黄芩苷峰为参照峰，计算各共有峰的相对保
“2.4.1”项下色谱条件进样测定，得混合对照品溶液的
留时间和相对峰面积。结果显示，18个共有峰相对保留
HPLC 图（图 5）。将对照指纹图谱（图 4）与该图进行比
时间和相对峰面积的RSD均小于2.50％（n＝6），表明方
对，共指认4个共有峰，分别为野黄芩苷（8号峰）、野黄芩
法精密度良好。
素（14号峰）、木犀草素（15号峰）、芹菜素（17号峰）。
2.4.5 稳定性试验 取“2.4.2”项下供试品溶液（编号
8
S1），分别于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.4.1”项
75.00
下色谱条件进样测定，记录色谱图。以野黄芩苷峰为参
照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结
50.00
果显示，18个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD mAU 17
均小于3.00％（n＝6），表明供试品溶液于室温下放置24 25.00
h内稳定性良好。 14 15
2.4.6 重复性试验 取半枝莲药材（编号 S1），共 6 份， 0
0 8.70 17.39 26.09 34.78 43.48 52.17 60.00
按“2.1”项下方法制备半枝莲标准汤剂，按“2.4.2”项下方 t/min
8：野黄芩苷；14：野黄芩素；15：木犀草素；17：芹菜素
法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测
图5 野黄芩苷等成分混合对照品溶液的HPLC图
定，记录色谱图。以野黄芩苷峰为参照峰，计算各共有
峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，18个共有 2.4.8 相似度评价与共有峰峰面积差异分析 采用《中
峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.00％ 药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》进行相似
（n＝6），表明方法重复性良好。 度评价。结果显示，16批半枝莲标准汤剂指纹图谱与对
2.4.7 指纹图谱的建立 取 16 批半枝莲药材，按“2.1” 照指纹图谱的相似度分别为 0.994、0.996、0.992、0.996、
项下方法制备半枝莲标准汤剂，按“2.4.2”项下方法制备 0.989、0.993、0.964、0.994、0.997、0.982、0.996、0.982、
供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，将 16 0.993、0.993、0.990、0.965，均大于 0.96，表明不同批次半
批半枝莲标准汤剂的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相 枝莲标准汤剂所含主要成分的种类基本一致。16 批半
似度评价系统（2004A 版）》进行分析，以各色谱峰保留 枝 莲 标 准 汤 剂 共 有 峰 峰 面 积 的 RSD 为 20.52％ ～
时间及峰面积适中的 S1 样品为参照，设定时间窗宽度 68.66％，表明不同批次半枝莲标准汤剂所含主要成分的
为 0.20，以中位数法生成对照指纹图谱，采用多点校正 含量存在一定差异。结果见表5。
法生成叠加指纹图谱。结果显示，16批半枝莲标准汤剂 2.5 体外抗氧化活性相关化学成分的筛选
共有18个共有峰，其HPLC叠加指纹图谱见图3，对照指 以 16 批半枝莲标准汤剂的 DPPH、ABTS 自由基清
纹图谱见图4。 除实验的 IC50为因变量，共有峰峰面积为自变量，采用

中国药房 2022年第33卷第4期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4 ·429 ·