Page 50 - 《中国药房》2022年4期

表 3 16 批半枝莲标准汤剂中总黄酮含量的测定结果 表4 16批半枝莲标准汤剂的体外抗氧化活性测定结果
（n＝3） （n＝3）
编号 总黄酮含量/（mg/mL） 编号 总黄酮含量/（mg/mL） 编号 DPPH自由基清除实验的IC50/（mg/mL） ABTS自由基清除实验的IC50/（mg/mL）
S1 0.789 S9 0.897 S1 2.360 0.925
S2 0.765 S10 0.956 S2 2.727 0.939
S3 0.743 S11 0.662 S3 2.880 1.032
S4 1.053 S12 0.634 S4 1.120 0.684
S5 0.645 S13 0.925 S5 3.500 1.117
S6 0.814 S14 0.939 S6 2.222 0.919
S7 0.724 S15 0.996 S7 3.305 1.090
S8 0.634 S16 0.931 S8 3.560 1.158
S9 1.848 0.914
2.3.3 ABTS 自由基溶液的制备 精密称定 ABTS 41.0 S10 1.796 0.772
mg、K2S2O8 18.0 mg，分别置于 10 mL 量瓶中，加水溶解 S11 3.353 1.103
并定容，得ABTS贮备液和K2S2O8贮备液；分别精密吸取 S12 3.602 1.327
S13 1.832 0.878
上述单一贮备液各2.5 mL，置于100 mL量瓶中，加水定
S14 1.797 0.872
容，摇匀，即得 ABTS 自由基溶液，避光储存 12～16 h， S15 1.570 0.734
备用。 S16 1.967 0.916
RSD/％ 32.96 17.52
2.3.4 样品溶液的制备 取16批“2.1”项下半枝莲标准
相关系数 －0.976 a －0.940 a
汤剂，滤过，取续滤液，即得样品溶液。取上述样品溶
a：P＜0.01
液，加水稀释，制得质量浓度（以生药量计）分别为0.50、
90.00
0.75、1.00、1.50、2.50、3.75、5.00 mg/mL 的系列样品溶液
80.00
A，用于DPPH自由基清除率的测定；同法制得质量浓度 70.00
（以生药量计）分别为 0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、2.00、 60.00
2.50 mg/mL 的系列样品溶液 B，用于 ABTS 自由基清除 50.00
率的测定。 清除率/％ 40.00
2.3.5 DPPH自由基清除率的测定 取“2.3.1”项下阳性 30.00
20.00
对照溶液、“2.3.4”项下系列样品溶液A各50 μL，加至96
10.00
微孔板中，再加入“2.3.2”项下DPPH自由基溶液100 μL，
0
避光反应 30 min 后，使用酶标仪于 517 nm 波长处测得 0 2 4 6 8 10 12
质量浓度/（mg/mL）
吸光度（A）；用水代替样品溶液，同法测得吸光度（B）。按 S1清除率 S2清除率 S3清除率 S4清除率 S5清除率 S6清除率 S7清除率 S8清除率 S9清除率
S10清除率 S11清除率 S12清除率 S13清除率 S14清除率 S15清除率 S16清除率 阳性对照清除率
公式计算 DPPH 自由基清除率：DPPH 自由基清除率＝ A. DPPH自由基
[ （B－A）/B]×100％ 。每样品平行操作 3 次，取平均 100.00
[15]
90.00
值。由于各批半枝莲标准汤剂对 DPPH 自由基的清除 80.00
70.00
率与其质量浓度不成线性关系，因此采用 SPSS 24.0 软 60.00
件中的 Probit 方法对 DPPH 自由基清除率进行回归分 50.00
40.00
析。结果显示，拟合后的方程为 Probit（P）＝Intercept+ 清除率/％ 30.00
Bx（式中，Intercept 表示截距，B 表示斜率，P 为 DPPH 自 20.00
10.00
由基清除率，x 为半枝莲标准汤剂稀释后的质量浓度； 0
0 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00
Probit＝0.50 时，半枝莲标准汤剂的相应浓度以生药量 质量浓度/（mg/mL）
S1清除率 S2清除率 S3清除率 S4清除率 S5清除率 S6清除率 S7清除率 S8清除率 S9清除率
计）。经χ 检验后，得到半数抑制浓度（median inhibitory S10清除率 S11清除率 S12清除率 S13清除率 S14清除率 S15清除率 S16清除率 阳性对照清除率
2
concentration，IC50 ），其值越小表示半枝莲标准汤剂的体 B. ABTS自由基
[10]
外抗氧化活性越强 。结果见表4、图2A。 图 2 16 批半枝莲标准汤剂和阳性对照溶液对 DPPH、
ABTS自由基的清除能力
2.3.6 ABTS自由基清除率的测定 取“2.3.1”项下阳性
对照溶液、“2.3.4”项下系列样品溶液B各50 μL，加至96 2.3.7 相关性分析 采用 SPSS 24.0 软件以 Pearson 相
微孔板中，再加入“2.3.3”项下ABTS自由基溶液100 μL， 关性分析评价半枝莲标准汤剂中总黄酮含量与IC50的相
避光反应6 min后，使用酶标仪于734 nm波长处测定吸 关性，结果见表4。由表4可知，半枝莲标准汤剂中总黄
光度（A）；用水代替样品溶液，同法测定吸光度（B）。按 酮的含量与DPPH、ABTS自由基清除实验的IC50均呈负
“2.3.5”项下公式及方法计算 ABTS 自由基清除率的 相关（P＜0.01），相关系数分别为－0.976、－0.940，表明
[15]
IC50 。每样品平行操作 3 次，取平均值。结果见表 4、 半枝莲标准汤剂中总黄酮含量越高，其体外抗氧化活性
图 2B。 越强。

·428 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 4 中国药房 2022年第33卷第4期