Page 45 - 《中国药房》2021年23期
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黄草乌Aconitum vilmorinianum Kom.为毛莨科乌头           Ca -ATP酶（SERCA2）单克隆抗体（批号GR3182873-9）、
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                                  [1]
        属多年生草本植物的干燥块根 ，具有祛风散寒、活血止                          兔源 3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）单克隆抗体（批号
        痛的功效，临床用于治疗风寒湿痹、跌打损伤和风湿关                           GR3250452-7）均购自英国 Abcam 公司；山羊抗兔辣根
                 [2]
        节 疼 痛 等 ，被 收 载 于 2005 年 版《云 南 省 中 药 材 标            过氧化物酶（HRP）标记的免疫球蛋白 G（IgG）抗体（批
           [3]
        准》 。本课题组前期研究发现，黄草乌及其炮制品都有                          号 GR3321256-8）购自美国 Bioworld 公司；超敏 ECL 化
        明显的镇痛作用，但其毒性剂量和疗效剂量接近，限制                           学发光即用型底物（批号 B347825E）购自美国 Boster 公
                            [4]
        了其在临床的广泛使用 。滇乌碱是从黄草乌中提取、                           司；其余试剂均为分析纯，水为双蒸水。
        分离得到的主要药效成分，但也是毒性成分 。温玉莹                           1.3 动物
                                              [5]
        等 的研究结果显示，黄草乌经十二指肠给药后，小鼠心                              本研究所用动物为SPF级SD大鼠，共32只，雌雄各
          [6]
                                       [7]
        律失常的发生率为100％。黎虽宇等 研究发现，黄草乌                         半，体质量为 240～260 g，由广东省医学实验动物中心
        生品能使大鼠出现室性早搏等心律失常现象；而黄草乌                           提供，实验动物生产许可证号为 SCXK（粤）2018-0002、
        经炮制后，生物碱含量减少，且对大鼠心电图的各项指                           质量合格证号为 44007200078479。大鼠购入后饲养于
        标也无明显影响，提示黄草乌炮制前后诱导大鼠心律失                           广东药科大学实验动物中心 SPF 级动物房中[实验动物
        常的毒性差异可能与滇乌碱含量变化有关。然而，关于                           使用许可证号为SYXK（粤）2017-0125]。实验室环境温
        滇乌碱诱导心律失常的毒性机制仍未明确。                                度为20～25 ℃，相对湿度为40％～70％，12 h照明/12 h
            心律失常是最常见的心血管疾病，是主要由于心脏                         黑暗循环。本实验动物方案已获得广东药科大学实验
        冲动起源部位、兴奋秩序以及传导速度异常而引起的心                           动物伦理委员会批准。
        脏搏动频率与节律障碍。心律失常不仅会加重原有心                            2 方法
        脏疾病的进展（如加速心力衰竭），而且也是导致患者发                          2.1  分组与给药
        生猝死的重要原因之一 。Ca 不仅是维持心脏电活动                              采用随机数字表法将 32 只大鼠随机分为正常对照
                            [8]
                                  2+
        的关键因素，也是引发心肌收缩的直接激活剂，因此任                           组，滇乌碱低、高剂量组（0.09、0.14 mg/kg）和乌头碱组
                2+
        何引起 Ca 含量波动的因素都会影响心肌兴奋-收缩偶                         （阳性对照，0.88 mg/kg），每组8只。各给药组大鼠的给
                                     [9]
        联（ECC）过程，最终导致心律失常 。基于此，本研究拟                        药剂量是参考文献[10－11]及前期预实验结果设置，其
        从整体动物水平观察滇乌碱对大鼠心电图的影响，并探                           中滇乌碱低、高剂量分别为大鼠的 1/6、1/4 半数致死量
        究其对腺苷三磷酸（ATP）含量及Ca -Mg -ATP酶活性、                    （LD50 ），乌头碱的剂量为大鼠的 1/10 LD50。各给药组大
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        Na -K -ATP酶活性、心肌细胞中Ca 含量、钙转运相关蛋                    鼠灌胃相应药物（均以生理盐水为溶剂溶解），正常对照
          +
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             +
        白表达水平的影响，进一步揭示滇乌碱诱导心律失常的                           组大鼠灌胃等体积的生理盐水；灌胃体积均为10 mL/kg，
        毒性机制，为黄草乌的临床安全使用提供实验依据。                            每天1次，连续7 d。
        1 材料                                               2.2  心电图观察
        1.1  主要仪器                                              末次灌胃1 h后，腹腔注射3％水合氯醛（10 mL/kg）
            本研究所用主要仪器有 BL-420F 型生物信号采集                     将大鼠麻醉，然后将大鼠按仰卧位固定，并将正向电极
        处理系统（成都泰盟软件有限公司），Infinite 200 PRO型                 插入其右上肢，负向电极插入其左下肢，底线插入其右
        多功能荧光酶标仪（奥地利 Tecan Austria GmbH 公司），               下肢，然后使用生物信号采集系统采集大鼠60 min内的
        HZT-A1000型电子天平（福州华志科学仪器有限公司），                      Ⅱ导联心电图，记录并分析其心率、QRS 波、PR 间期以
        3100 型 CO2培养箱（广州市源起生物科技有限公司），                      及校正后QT间期（QTc间期）的变化。其中，QTc间期是
        Mini型蛋白电泳系统（美国Bio-Rad公司），LG2000型数                  根据公式QTc＝QT/RR 计算得到（RR为标准化的心率
                                                                               1/2
        码凝胶图像分析系统（杭州朗基科学仪器有限公司）。                           值，根据60除以心率得到） 。
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        1.2 主要药品与试剂                                        2.3 标本采集与处理
            滇 乌 碱 对 照 品（批 号 MUST17102101，纯 度 ≥                 记录大鼠的心电图后，将大鼠处死，打开其胸腔，在
        98％）、乌头碱对照品（批号 MUST17110910，纯度≥                    无菌条件下迅速剥离其心脏。心脏用生理盐水冲洗，并
        98％）均购自成都曼斯特生物科技有限公司；ATP 含量                        用滤纸吸干，置于－80 ℃冰箱中保存，备用。
        测定试剂盒（批号 20200712）、ATP 酶活性测定试剂盒                    2.4 心肌组织中ATP含量测定
       （批号 20200628）和二喹啉甲酸（BCA）蛋白浓度测定试                         称取心肌组织样本 0.1 g，以水制成 100 g/L 的匀浆
        剂盒（批号20200723）均购自南京建成生物工程研究所；                      液后，置于沸水浴中煮10 min；取出，涡旋混匀1 min，然
                    2+
        Fluo-3/AM Ca 荧光探针（批号75400150）购自北京鼎国                后以3 500 r/min离心10 min，取上清液。根据ATP含量
        昌盛生物技术有限公司；兔源雷诺定受体2（RyR2）单克隆                       测定试剂盒说明书方法操作，通过酶标仪测定各组大鼠
        抗体（批号GR3200692-1）购自美国Proteintech公司；兔源              心肌组织中ATP的含量。


        中国药房    2021年第32卷第23期                                             China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 23  ·2855 ·
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