Page 56 - 2021年19期

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of 17 quality markers in Dahuang zhechong
pills（DHZCP）. METHODS：HPLC method was adopted to determine the contents of 17 quality markers in 10 batches of DHZCP，
such as allantoin，hypoxanthine，salidroside，hydroxypaeoniflorin，glycyrrhizin，isoglycyrrhizin，baicalin，p-methoxyphenylacetic
acid，wogonin，cinnamic acid，apigenin，naringin，norwogonin，aloe emodin，rhein，chrysin，emodin. The determination was
performed on Kromasil 100-5-C18 （250 mm × 4.6 mm，5 μ m） column with mobile phase consisted of 0.1％ phosphoric acid
solution-acetonitrile （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 30 ℃ ，the detection
wavelength was 210 nm and the sample size was 20 μ L. RESULTS：The linear range of above 17 quality markers were
5.74-183.53，6.51-208.24，4.30-137.65，4.60-147.06，4.12-131.76，4.25-135.88，6.31-201.76，4.60-147.06，1.94-62.06，4.47-
142.94，0.69-22.06，2.29-73.24，2.33-74.41，1.42-45.29，6.65-212.94，1.11-35.44 and 1.47-47.06 μg/mL，respectively（all R ≥
2
0.999 0）. RSDs of precision，repeatability，stability and durability tests were all less than 2％（n＝6）；average recovery of 17
quality markers ranged from 96.31％ to 101.73％，and the RSDs were less than 3％（n＝6）. CONCLUSIONS：The method is simple，
rapid，speific，specise，reproducible，stable，accurate and durable，and can be used for improving the quality standard of DHZCP.
KEYWORDS Dahuang zhechong pills；Quality marker；HPLC；Quality standard；Content determination

大黄䗪虫丸出自张仲景所著的《金匮要略》，收载于 自美国 Tedia 公司；磷酸（色谱纯）购自上海阿拉丁生化
[1]
2020 年版《中国药典》（一部） 。全方由大黄、䗪虫、水 科技股份有限公司；水为超纯水。10批大黄䗪虫丸来自
蛭、虻虫、蛴螬、桃仁、干漆、苦杏仁、白芍、黄芩、地黄、甘 不同生产商，其基本信息如表1所示。
草等12味中药组成，具有活血破瘀、通经消瘕等功效，临 表1 10批大黄䗪虫丸的基本信息
[2]
床常用于慢性肝病、肾病、妇科病、肿瘤的辅助治疗 。 Tab 1 Information of 10 batches of Dahuang zhechong
虽然历版《中国药典》中大黄䗪虫丸的质量标准在不断 pills
提高，但其含量测定项下始终仅关注大黄中的大黄素和 编号 剂型 批号 生产商
大黄酚成分，缺少其他药效成分的测定内容，不能全面 S1 大蜜丸 20111043 广盛原中医药有限公司
S2 大蜜丸 17013417 北京同仁堂股份有限公司
评价本药的内在质量。本课题组近年来一直从事大黄
S3 大蜜丸 4110005 天津中新药业集团股份有限公司
䗪虫丸抗肝癌机制及药效物质基础的研究，前期根据药 S4 小蜜丸 200701 西安正大制药有限公司
效学实验确定了 17 种与肝癌血管病变相关的质量标志 S5 水丸 2007042No008 同药集团大同制药有限公司
物 。在此基础上，本研究采用高效液相色谱（HPLC）法 S6 水丸 2004013 广盛原中医药有限公司
[3]
S7 水蜜丸 20030011 北京同仁堂股份有限公司
定量分析10批市售大黄䗪虫丸中17种质量标志物的含 S8 水蜜丸 20191211 回春堂药业股份有限公司
量，旨在为本药质量标准的提升提供参考。 S9 水蜜丸 20201004 广东恒诚制药股份有限公司
1 材料 S10 水蜜丸 200802 江苏颐海药业有限责任公司
1.1 主要仪器 2 方法与结果
本研究所用的主要仪器有 E2695 型 HPLC 仪（含 2.1 色谱条件
Empower型色谱工作站、2998型紫外检测器，美国Waters 色谱柱为 Kromasil 100-5-C18 （250 mm×4.6 mm，5
公司）、ATY124 型分析天平（日本 Shimadzu 公司，精度 μm），流动相为 0.1％磷酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱
为 0.000 1 g）、BT125D 型分析天平（德国 Sartorius 公司， （0～5 min，2％B→6％B；5～15 min，6％B→25％B；15～
精度为 0.000 01 g）、超纯水仪（美国 Millipore 公司）、 25 min，25％ B→38％ B；25～45 min，38％ B→65％ B；
KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 45～50 min，65％B→80％B；50～60 min，80％B→98％B；
1.2 主要药品与试剂 60～70 min，98％B→2％B；70～72 min，2％B），流速为
本研究所用的主要药品与试剂有尿囊素（批号 N- 1.0 mL/min，柱温为30 ℃，检测波长为210 nm，进样量为
015）、次黄嘌呤（批号 C-069-160412）、红景天苷（批号 20 μL。
H-040）、羟基芍药苷（批号Q-019-180709）、甘草苷（批号 2.2 供试品溶液的制备
G-009-161230）、黄芩苷（批号 H-016-170613）、对甲氧基 称取大黄䗪虫丸粉末约 1 g，精密称定，置于 50 mL
苯乙酸（批号 D-063-161216）、汉黄芩苷（批号 H-016- 离心管中，加入 20 mL 甲醇，静置 24 h 后超声（功率 250
1703673）、肉桂酸（批号R-003）、芹菜素（批号Q-002）、柚 W，频率40 kHz）1 h，冷却后用甲醇补足减失质量；抽滤，
皮 素（批 号 Y-030-171216）、去 甲 汉 黄 芩 素（批 号 过0.45 μm有机相滤膜，取续滤液，即得。
Q-014-170378）、芦荟大黄素（批号 L-014-161216）、大黄 2.3 对照品溶液的制备
酸（批号 D-010-160603）、白杨素（批号 B-001-170427）、 精密称取“1.2”项下 17 种对照品各适量，分别加入
大黄素（批号D-029-161216）等16种对照品（纯度均大于 甲醇溶解，制成质量浓度分别为尿囊素 3.12 mg/mL、次
98.0％），均购自成都瑞芬思生物科技有限公司；异甘草 黄嘌呤 3.54 mg/mL、红景天苷 2.34 mg/mL、羟基芍药苷
苷对照品（批号 DY0199，纯度＞98.0％）购自南京良纬 2.50 mg/mL、甘草苷2.24 mg/mL、异甘草苷2.31 mg/mL、
生物科技有限公司；甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）均购 黄芩苷 3.43 mg/mL、对甲氧基苯乙酸 2.50 mg/mL、汉黄

·2354 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 中国药房 2021年第32卷第19期