Page 31 - 《中国药房》2021年16期
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雷公藤Tripterygium wilfordii Hook. f.为卫矛科雷公       1.2 主要药品与试剂
        藤属植物，药用部位为根，首载于《神农本草经》，主产于                             雷公藤药材于2020年7月采自江西省萍乡市，经江
        我国长江中下游流域（如浙江、福建、江西、安徽等                            西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室刘建群
           [1]
        地） 。雷公藤味苦，性寒，有大毒，归肝、肾二经，具有清                        教授鉴定为卫矛科雷公藤属植物雷公藤 T. wilfordii
        热解毒、祛风通络、舒筋活血、消肿止痛、杀虫、止血等功                         Hook. f.的根；celafurine、celabenzine、celacarfurine、cela-
        效 。雷公藤在临床上常用于治疗类风湿性关节炎、慢                           cinnine对照品由本实验室从雷公藤药材中分离制得，经
          [2]
        性肾炎、红斑狼疮等难治性免疫功能亢进疾病，是治疗                           核磁共振（NMR）、UPLC-Q-TOF-MS/MS等技术鉴定，其
                      [3]
        风湿顽痹之要药 。生物碱类成分包括倍半萜生物碱和                           结构与文献[5，9－10]一致，经HPLC峰面积归一化法测
        大环多胺生物碱两类，是雷公藤的主要有效成分之一，                           得其纯度均大于 99％；甲酸（批号 J1815074，质谱纯）购
        具有免疫抑制、抗炎、镇痛、抗肿瘤、抗艾滋病、保护神经                         自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；甲醇（批号
                      [1]
        等多种药理活性 。其中，大环多胺生物碱具有13元大
                                                           06C1612FK，质谱纯）购自美国 ACS 公司；乙醇（批号
                                                     [1]
        环母核，大环上一般含有 3 个氮原子，结构较为独特 。
                                                           18092202，分析纯）购自西陇科学股份有限公司；水为超
        目前报道的天然大环多胺生物碱虽然较少，但其具有抗
                                                           纯水。
        寄生虫、抗质粒DNA断裂、抗肿瘤和抗炎等多种药理作                          2 方法
        用 [4－5] ，药用研究前景较广阔。
                                                           2.1 溶液的制备
            本课题组前期从雷公藤中分离、鉴定出了 4 个大环
                                                           2.1.1  雷公藤总提取物溶液           称取雷公藤药材3.8 g，粉
        多胺生物碱，分别为celafurine、celabenzine、celacarfurine
                                                           碎后过一号筛，加入 95％乙醇 50 mL，于 70 ℃加热回流
                                 [5]
        和 celacinnine（结构式见图 1） 。超高效液相色谱与高
                                                           提取3次（时间分别为1.5、1.5、1 h），合并3次提取液，减
        分辨质谱联用技术已成为复杂中药化学成分快速表征
                                                           压浓缩至2 mL。取浓缩液200 μL，加入甲醇400 μL，混
        的主要技术。通过研究已知中药化合物的多级质谱裂
                                                           匀，过0.22 μm有机滤膜，收集滤液，即得。
        解规律，总结其特征碎片，从而建立中药化合物快速鉴
                                                           2.1.2  对照品溶液       称取 celafurine、celabenzine、celac-
        定和复杂体系成分表征的质谱方法已成为中药复杂体
        系化学成分快速识别研究的热点               [6－8] 。鉴于此，本课题        arfurine、celacinnine 对照品各适量，分别用甲醇溶解，制
        组拟在前期研究基础上，采用超高效液相色谱-四极杆-                          成质量浓度均为0.5 mg/mL的溶液，即得。
        飞行时间串联质谱技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）对雷公                    2.2  UPLC-Q-TOF-MS/MS测定条件
        藤 中 celafurine、celabenzine、celacarfurine 和 celacinnine  2.2.1  色谱条件  以 Hypersil GOLDTM C18 （100 mm×
        等4个大环多胺生物碱的质谱裂解规律进行研究，以期                           2.1 mm，1.9 μm）为色谱柱，以 0.1％甲酸溶液（A）-甲醇
        为该类生物碱的快速识别提供新方法。                                  （B）为流动相进行梯度洗脱（0.01～20 min，10％B→
                                                           32％B；20～45 min，32％B→90％B；45～47 min，90％B；
                                                           47～47.1 min，90％B→10％B；47.1～50 min，10％B）；
                                                           流速为 0.25 mL/min；柱温为40 ℃；进样量为2 μL。
                                                           2.2.2  质谱条件      离子源为电喷雾离子源，扫描模式为
                                                           正离子模式；喷雾电压为5 500 V，离子源温度500 ℃；裂
        图 1 celafurine、celabenzine、celacarfurine 和 celacin-  解电压为 100 V；碰撞能量为 35 eV，碰撞能量扩展为 15
             nine的结构式                                      eV；雾化气为N2，雾化气压力为50 psi；辅助气1（GS1）压
        Fig 1 The structures of celafurine，celabenzine，cela-  力为50 psi，辅助气2压力（GS2）为50 psi；气帘气（CUR）
              carfurine and celacinnine                    压力为40 psi；母离子扫描范围为m/z 100～2 000。
        1 材料                                               2.3 样品测定及分析
        1.1 主要仪器                                               取“2.1”项下雷公藤总提取物溶液和对照品溶液各
            LC-30A 型高效液相色谱（HPLC）仪购自日本 Shi-                 2 μL，分别按“2.2”项下条件进样测定，记录图谱。采用
        madzu 公司；AB Sciex Triple TOF 5600 型质谱仪购自美          PeakView 1.2软件分析各对照品和雷公藤总提取物的质
        国 AB Sciex 公司；N-1300 型旋转蒸发仪购自日本 EYE-               谱信息，并总结 4 个大环多胺生物碱对照品的裂解规
        LA 公司；GZX-9140 MB 型数显鼓风干燥箱购自上海博                    律。根据保留时间、精确分子量及二级碎片离子信息，
        讯实业有限公司；BT25S型十万分之一电子天平购自德                         参照大环多胺生物碱对照品的质谱裂解规律，对雷公藤
        国Sartorius公司；Milli-Q型超纯水制备仪购自美国Mil-                总提取物中的大环多胺生物碱成分进行快速识别，并通
        lipore公司。                                          过查阅Scifinder数据库判断其是否为新化合物。


        中国药房    2021年第32卷第16期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16  ·1945 ·
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