Page 136 - 中国药房2021年11期
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2.6 ELISA法                                          3 安全性评价方法
            ELISA 法是基于抗原抗体的特异性结合反应与酶                            桔梗作为一种集药、食、赏为一体，具有较高综合经
        催化显色反应相结合的检测技术，具有简便快速、高通                            济价值的药用植物，在我国的栽培历史可追溯至20世纪
        量等优势，近年来在中药质量快速评价领域应用广                              70年代，距今约50年。另一方面，桔梗在朝鲜、韩国、日
                    [50]
          [49]
        泛 。Luo 等 以桔梗皂苷 D 为半抗原，通过高碘酸钠                        本等国有较高需求量，是我国主要的出口中药材之一。
        法将其与载体蛋白偶联制备了完全抗原，进一步通过免                            因此，为追求高产量或便于田间管理，在桔梗的栽培过
        疫新西兰大耳兔后分离制备了可识别桔梗皂苷 D 的抗                           程中经常会使用农药，常用的以有机氯、有机磷等杀虫
        血清，最终基于完全抗原与抗血清建立了桔梗皂苷D的                            剂和扑草净、萘氧丙草胺等除草剂为主，容易导致农药
        ELISA 检测方法。该方法的灵敏度以半数抑制浓度                           残留，影响桔梗的质量和安全性。再者，由于栽培地区
        （IC50 ）计为 2.70 μg/mL，检测范围为 0.032～2.70 μg/mL；        土壤污染或桔梗生产加工过程污染，均会导致桔梗重金
        且该方法对其他皂苷类成分（包括桔梗皂苷D2、D3、E，去                        属超标，故有必要对重金属含量进行监测，以保障桔梗
        芹糖桔梗皂苷E，远志皂苷D2 ）无明显交叉反应，说明其                         药材的安全性。
        检测结果准确可靠，可用于桔梗的质量评价。                                3.1 农药残留检测方法
        2.7 一测多评法                                               目前，桔梗中有机氯农药残留的检测主要以气相色
            一测多评法的评价模式是以药材中一种典型成分                           谱法（GC）为主，而有机磷杀虫剂或其他广谱杀虫剂以
        为参照，通过建立参照物与其他成分之间的相对校正因                            及除草剂的检测以 GC-MS 法为主。焦阳等 采用分散
                                                                                                  [56]
        子（RCF），并根据RCF计算其他成分的含量的方法。该                         固相萃取结合 GC 法建立了检测 11 种有机氯农药残留
        方法可实现利用一个标准品达到多成分同步快速测定                             的方法并用于 3 批待出口桔梗的检测，结果发现 3 批桔
        的目的，具有经济、稳定、快捷等优点，在中药质量评价                           梗均无农药残留。该方法检出限低（1.5～9.8 μg/kg）、线
        领域应用广泛，如今已被 2015 版《中国药典》（一部）收                       性关系好、精密度高，可满足桔梗中农药残留检测的需
        录  [51] 。 蒋 龄 周 等  [52]  以 桔 梗 皂 苷 D 为 内 标 ，通 过     要。汤军华等 建立了包含有机磷和广谱杀虫剂以及
                                                                        [57]
        HPLC-ELSD建立了桔梗皂苷D与桔梗皂苷D3和桔梗皂                        杀螨剂在内的6种农药残留的GC-MS检测方法，结果发
        苷 E 的 RCF，实现了三者含量的同步检测；进一步通过                        现，栽培桔梗较野生品种含有更多农药残留，需引起重

        10批次桔梗药材的验证发现，一测多评法测定结果与外                           视。吴明根等 建立了桔梗药材中扑草净和萘氧丙草
                                                                        [58]
        标法一致。                                               胺的 GC-MS 检测方法，其分别以 40％扑草净（0.2、0.4
        2.8  其他                                             g/m）和 50％萘氧丙草胺（0.2、0.4 g/m）处理桔梗，半年
                                                                                            2
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            除上述方法外，其他先进技术[如超高液相色谱                           后收获药材并检测，发现扑草净残留量分别为 0.028
        （UPLC）]和先进理念[如质量标志物（Q-Marker）理论]也                   mg/kg 和 0.036 mg/kg，超出日本和德国等国家标准，而
        逐渐应用于桔梗药材的质量评价中。                                    萘氧丙草胺则未检出。
                  [53]
            陈宝等 利用UPLC法同时测定了不同产地桔梗药                         3.2  重金属检测方法
        材中的13种核苷类成分，结果发现，桔梗中含有丰富的                               桔梗中重金属的检测方法主要以电感耦合等离子
        核苷类成分，但不同产地样品间核苷类成分含量的差异                            体质谱法（ICP-MS）和原子吸收光谱法（AAS）为主。赵
        显著；同时，该方法检测准确、快速、重复性好，为桔梗的                          宏苏等 采用ICP-MS法测定了山东、安徽、内蒙古等主
                                                                  [59]
        质量评价提供了新思路。                                         产地桔梗中铜、砷、铅、镉、汞等5种重金属的含量，结果
            Q-Marker 理论是刘昌孝院士等在 2016 年基于中医                  发现，其重金属含量均符合《药用植物及其制剂进出口
        药理论和植物学科相关理论，以化学生物学技术为手                             绿色行业标准》的限量规定。同时，在检测过程中
        段，系统解析中药有效性的内在化学成分而建立的多元                            ICP-MS 法呈现出检测限低、精密度好、干扰少、多种重

                                [55]
                    [54]
        质量评价理论 。韦金玉等 通过系统分析桔梗的质量                            金属可同时测定等优势，利用此技术检测桔梗中重金属
                                                                                   [60]
        控制现状及其化学成分组成，从Q-Marker的核心理论出                        含量简便可行。魏庆红等 利用 AAS 法测定了出口桔
        发，推荐桔梗皂苷A、D、D3、E，桔梗炔苷A、B，党参炔苷，                      梗饮片中铅和镉的含量，结果发现，桔梗中铅含量为
        木犀草素，芹菜素，桔梗多糖和苦味氨基酸等为桔梗                             0.96 mg/kg，镉含量为0.083 mg/kg；且该方法操作较为简
        Q-Marker的首选成分，为进一步评价桔梗的质量提供了                        单、检测快速、灵敏度较高，同样适用于桔梗中药材的重
        参考。                                                 金属含量测定。


        ·1406 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11                                 中国药房    2021年第32卷第11期
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