Page 80 - 《中国药房》2021年第9期

咖 啡 酸 质 量 浓 度 分 别 为 0.18、0.35、0.88、1.76、8.80 再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，计算加
μg/mL，绿原酸质量浓度分别为 2.00、4.00、10.01、20.01、 样回收率（表 9）。结果，新绿原酸、咖啡酸、绿原酸和隐
100.05 μg/mL，隐绿原酸质量浓度分别为 0.62、1.23、 绿原酸的平均加样回收率分别为 97.92％、97.96％、
3.08、6.15、30.76 μg/mL 的线性混合对照品溶液。精密 96.23％、98.17％，RSD 分别为 1.14％、2.28％、2.25％、
吸取上述各线性混合对照品溶液与“2.2”项下混合对照 0.96％（n＝6），表明该方法准确度良好。
品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。 表9 4种酚酸类成分的加样回收率试验结果（n＝6）
以各成分峰面积（y）对对照品溶液的质量浓度（x）进行 Tab 9 Average recoveries of 4 kinds of phenolic acids
线性回归处理，得回归方程及线性范围，如表8所示。 （n＝6）
表8 4种酚酸类成分的回归方程及线性范围 成分 样品含量，mg 对照品加入量，mg 测得量，mg 回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％
Tab 8 Regression equation and linear range of 4 新绿原酸 0.336 0.307 0.634 97.01 97.92 1.14
0.337 0.307 0.638 98.09
kinds of phenolic acids
0.340 0.307 0.638 97.04
成分 回归方程 R 2 线性范围，μg/mL 0.339 0.307 0.639 97.48
新绿原酸 y＝9 999.15x－2 237.95 ＞0.999 9 0.61～61.41 0.346 0.307 0.653 100.03
咖啡酸 y＝17 688.30x－1 453.79 ＞0.999 9 0.18～17.60 0.341 0.307 0.642 97.90
绿原酸 y＝10 166.71x－7 970.55 ＞0.999 9 2.00～200.11 咖啡酸 0.033 0.022 0.054 96.55 97.96 2.28
隐绿原酸 y＝9 449.59x－2 433.60 ＞0.999 9 0.62～61.51 0.033 0.022 0.055 98.69
2.7.3 检测限和定量限测定 0.033 0.022 0.054 95.28
0.033 0.022 0.055 99.14
取“2.2”项下混合对照品溶液，以甲醇按比例稀释， 0.034 0.022 0.056 101.45
按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比 3 ∶ 1、10 ∶ 1 分 0.033 0.022 0.055 96.64
别测定检测限和定量限。结果，新绿原酸、咖啡酸、绿原 绿原酸 2.335 2.335 4.349 94.64 96.23 2.25
2.340 2.340 4.381 99.27
酸和隐绿原酸的检测限分别为0.102 9、0.060 7、0.106 3、 2.359 2.359 4.757 96.83
0.118 3 μg/mL，定量限分别为 0.343 2、0.102 2、0.354 4、 2.357 2.357 4.298 93.30
0.394 3 μg/mL。 2.405 2.405 4.380 97.75
2.369 2.369 4.403 95.56
2.7.4 精密度试验 隐绿原酸 0.397 0.308 0.696 97.12 98.17 0.96
精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液适量，按“2.1” 0.398 0.308 0.698 97.65
项下色谱条件连续进样测定6次，记录色谱图。结果，新 0.401 0.308 0.702 97.90
0.401 0.308 0.703 98.24
绿原酸、咖啡酸、绿原酸和隐绿原酸峰面积的 RSD 分别 0.409 0.308 0.716 99.90
为 0.15％、1.18％、0.15％、0.27％（n＝6），表明仪器精密 0.403 0.308 0.705 98.19
度良好。 2.7.8 样品含量测定
2.7.5 稳定性试验 取 20 批有柄石韦药材样品粉末，分别按“2.3”项下
精密吸取同一供试品溶液（编号S1）适量，室温下放 方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测
置0、2、4、8、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件分别进样测 定，记录色谱图，采用外标法计算样品中新绿原酸、咖啡
定，记录色谱图。结果，新绿原酸、咖啡酸、绿原酸和隐 酸、绿原酸、隐绿原酸的含量，并计算4种成分的总含量
绿原酸峰面积的 RSD 分别为 0.28％、1.42％、0.73％、 （表10）。结果显示，不同批次有柄石韦药材中4种酚酸
0.26％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h 内稳 类成分的含量具有一定差异；平均总含量排序为重庆
定性良好。 产药材量＞四川产药材＞贵州产药材，与主成分分析结
2.7.6 重复性试验 果一致。
取同一批有柄石韦样品（编号 S1）6 份，每份约 0.5 3 讨论
g，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项 3.1 色谱条件优化
下色谱条件进样测定，记录色谱图，采用外标法计算样 笔者分别考察了甲醇与不同浓度的磷酸、甲酸溶液
品含量。结果，新绿原酸、咖啡酸、绿原酸和隐绿原酸的 组合的流动相体系，发现甲醇-0.1％磷酸溶液的梯度洗
平均含量分别为 1.76、0.07、10.73、1.80 mg/g，RSD 分别 脱程序效果最佳，故选其作为本研究的流动相。后采用
为 1.84％、1.88％、1.91％、1.74％（n＝6），表明该方法重 二极管阵列检测器，对供试品溶液在 200～400 nm 波长
复性良好。 范围内进行全波长扫描，结果显示各主要成分色谱峰在
2.7.7 加样回收率试验 326 nm 波长处均有较强的紫外吸收，故选择 326 nm 为
取已知含量的有柄石韦样品（编号S14）粉末约0.25 检测波长。
g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别按各成分含量1∶1比 3.2 指纹图谱结果分析
例精密加入对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液， 本研究建立了有柄石韦的 UPLC 指纹图谱，该方法

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