Page 53 - 《中国药房》2021年第9期
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2019年《中国心血管健康与疾病报告》推算，我国心                      司），R1002B 型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司），
        血管疾病现患人数约 3.3 亿，心力衰竭患者人数约 890                      SHB-B95型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限
                                        [1]
        万，其中慢性心力衰竭患者约 400 万 。心力衰竭是各                        公司），Christ ALPHA 1-2 LD plus 型冷冻干燥机（德国
        种心脏疾病的终末期，由于其较高的发病率和病死率，                           Christ公司）。
                                          [2]
        目前仍是严重危害人类健康的主要原因 。相关研究发                           1.2 主要药品与试剂
        现，心力衰竭最主要的致病因素为原发性心肌损害和异                               本研究所用干姜饮片购自北京绿野药业有限公司
          [3]
        常 。其中，原发性心肌损害指各种类型的心肌病和心                           （批号17072001），经中国人民解放军总医院第五医学中
                                           [4]
        肌炎，包括扩张型心肌病和病毒性心肌炎 、糖尿病心肌                          心药学部赵艳玲研究员鉴定为姜科植物姜 Z. officinale
                                   [6]
          [5]
        病 、系统性红斑狼疮性心肌病 等。其次，异常的心脏                          Rosc.的干燥根茎。其他药品与试剂有：盐酸阿霉素
        负荷如压力负荷（后负荷）过重以及容量负荷（前负荷）                          （成都克洛玛生物科技有限公司，批号 CHB160921，纯
        过重也可引起心力衰竭           [7－8] 。此外，感染、心律失常、血           度 ≥98％），DMEM 培养基（美国 Hyclone 公司，批号
        容量增加以及药物治疗不当等也是诱发心力衰竭的原                            SH30022.01），FBS 胎 牛 血 清（以 色 列 BI 公 司 ，批 号
        因 。                                                04-001-1ACS），胰蛋白酶、青-链霉素、磷酸盐缓冲液
          [3]
            心室肌重构和神经内分泌紊乱在心力衰竭发生与                          （PBS）、丙酮酸、谷氨酰胺[中科迈晨（北京）科技有限公
                            [3]
        发展中发挥着重要作用 ，心室肌代谢重构包括线粒体                           司，批号分别为CC017、CC033、CC008、CC007、CC009]，
        功能的改变以及能量代谢底物利用的转变 。线粒体为                           二甲基亚砜（DMSO）、葡萄糖（美国 Sigma 公司，批号分
                                            [9]
        心肌细胞的能量加工厂，其能量代谢功能障碍是引起心                           别为D2650、G8769），细胞呼吸表型检测试剂盒、细胞线
        力衰竭的重要原因        [10－11] 。因此，可通过药物改善心肌细             粒体压力检测试剂盒（美国Seahorse Bioscience公司，批
        胞线粒体能量代谢功能，从而防治心力衰竭 。                              号分别为 103275-100、9832913），Seahorse XF 基础培养
                                             [12]
            天然药物具有多成分、多靶点、多作用通路的特点，                        基[安捷伦科技（中国）有限公司，批号13417002]，CCK-8
        在心力衰竭的防治中发挥着独特优势                 [13－14] 。干姜为姜     试剂盒（美国Med Chem Express公司，批号HY-K0301），
        科植物姜 Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎，味辛，性           Hoechst 33342 核酸染料、钙黄绿素、溴乙啡锭二聚体 1
        热，具有温中散寒、回阳通脉的功效，是“热”性中药的典                         （美 国 Invitrogen 公 司 ，批 号 分 别 为 H3570、C3099、
                  [15]
        型代表之一 。相关研究发现，干姜提取物可显著改善                           L3224）；其余试剂为实验室常用规格试剂，水为纯净水。
        心力衰竭模型兔的心肌舒缩性，缓解其心力衰竭症状，                           1.3  细胞
        保护心功能 。另有研究发现，干姜中活性化学成分姜                               本研究所用细胞为大鼠 H9c2 心肌细胞株，购自中
                  [16]
        辣素具有改善兔心血管功能的作用 。但干姜中活性                            国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
                                       [17]
        成分是否可通过改善心肌细胞线粒体能量代谢功能来                            2 方法
        改善心功能，尚不明确。                                        2.1  干姜水煎液的制备
            基于此，本研究以干姜水煎液为研究对象，以阿霉                             称取干姜饮片 100 g，以 10 倍量水（按 mL/g 计，下
        素所致大鼠H9c2心肌细胞线粒体功能损伤模型为研究                          同）浸泡 30 min，加热回流提取 1.5 h 后，用双层纱布过
        载体，检测干姜水煎液对 H9c2 心肌细胞增殖、形态学、                       滤；滤渣加入 8 倍量水，再次回流提取 1 h，过滤；合并 2
        呼吸功能和线粒体能量代谢的影响，来考察该水煎液对                           次滤液，采用旋转蒸发仪于 80 ℃、70 r/min、－0.06 MPa
        H9c2心肌细胞线粒体功能损伤的改善作用，以期为心力                         条件下浓缩后，于 85 ℃水浴条件下蒸发得稠浸膏。浸
        衰竭的新药研发提供参考。                                       膏于－80 ℃条件下冷冻后，置于冷冻干燥机中减压干
        1 材料                                               燥，制成冻干粉末（得率为23.05％，以生药量计），备用。
        1.1 主要仪器                                           2.2 细胞培养
            本研究所用主要仪器有：HERAcell 150i型CO2普通                     将H9c2心肌细胞培养于含10％FBS和1％青-链霉
        培养箱、Cellomics Array Scan XT1 Infinity 型高内涵筛        素的 DMEM 培养基（以下简称培养基）中，置于 37 ℃、
        选 系统（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Agilent       5％CO2的恒温培养箱中培养，待细胞生长至对数期时，
        Seahorse XFp 型细胞能量代谢分析仪（美国 Seahorse                采用0.25％胰蛋白酶消化后进行传代、接种或冻存。
        Bioscience公司），TD5A型台式低速离心机（湖南赫西仪                   2.3 H9c2心肌细胞存活率的测定
        器装备有限公司），DM 1L LED D-35578 型倒置显微镜                      参考文献[18]方法，采用 CCK-8 法进行检测。取对
       （德国 Leica 公司），TC10 型细胞计数器（美国 BioRad 公               数生长期的 H9c2 心肌细胞，以培养基稀释成细胞密度
                                                                  4
        司），SynergyH1 型全功能微孔板检测仪（美国 BioTek 公                为8×10 mL 的悬液，按100 μL/孔接种于96孔板中，于
                                                                      －1
        司），SXKW 型数显电热套（北京中兴伟业仪器有限公                         37 ℃、5％CO2的恒温培养箱中培养24 h后，将细胞分为

        中国药房    2021年第32卷第9期                                              China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 9  ·1071 ·
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