Page 38 - 《中国药房》2021年8期
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仙鹤草的药效并消减克制其毒副作用，制成复方。现该                            品溶液。取供试品溶液适量，按“2.1”“2.2”项下条件进
        方 已 被 研 发 成 复 方 仙 鹤 草 肠 炎 胶 囊（国 药 准 字               行UHPLC-MS/MS分析。利用Analyst 1.6.3软件对质谱
        Z53021633），由云南金碧制药有限公司生产上市。                         数据进行处理。基于 MWDB 数据库（由武汉迈特维尔
            中药复方成分复杂，其物质基础研究对质量控制、                          生物科技有限公司提供），根据各成分的二级质谱信息
                                                                                                    +
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        有效成分确定及药效机制探索等均具有重要意义。复                             对其进行定性分析，去除同位素信号，含K 、Na 、NH4 的
                                                                                                         +
        方仙鹤草肠炎胶囊现收录于 2020 年版《中国药典》（一                        重复信号，以及本身是其他更大分子量物质的碎片离子
           [3]
        部） 。其作为非处方药品在临床使用较为广泛，但是相                           的重复信号，再对确认的化合物数据进行归一化处理和
        关物质基础研究甚少，加之该复方涉及6味中药，其复杂                           聚类分析。通过与相关文献比对，确认复方仙鹤草肠炎
        的成分导致药效机制和有效成分不明确，进而在生产加                            胶囊甲醇提取物中的化学成分及归属。
        工过程中对其质量也难以进行有效控制。基于此，本研                            2.4 网络药理学分析
        究采用超高效液相色谱-串联质谱技术（UHPLC-MS/                         2.4.1  复方仙鹤草肠炎胶囊中活性成分及其潜在靶点
        MS）对复方仙鹤草肠炎胶囊甲醇提取物中的化学成分                            的筛选     在中药系统药理学分析平台（TCMSP，http：//
        进行分析，通过与 MWDB 数据库和文献对比来鉴定其                          lsp.nwu.du.cn/tcmsp.php）中分别输入复方仙鹤草肠炎胶
        活性成分及归属；借助网络药理学研究思路对鉴定出的                            囊中的6味中药（仙鹤草、黄连、木香、石菖蒲、桔梗和蝉
        活性成分进行信息挖掘，筛选出复方仙鹤草肠炎胶囊治                            蜕）进行成分检索，以口服生物利用度（OB）＞30％、类
        疗肠炎的主要有效成分和相关靶点，旨在为深入研究该                            药性（DL）＞0.18为标准，筛选复方仙鹤草肠炎胶囊中的
        制剂的药理作用提供参考。                                        活性成分    [5－6] 。将筛选出的活性成分导入PubChem数据
        1 材料                                                库（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/），结合 Perl 代码和
        1.1  主要仪器                                           UniProt 数据库（http：//www.uniprot.org/uniprot/）获取上
            本研究所用主要仪器包括 CBM30A 型 UHPLC 仪                    述活性成分的潜在靶点。
        （日本Shimadzu公司）、Applied Biosystems 6500 QTRAP        2.4.2  肠炎相关靶点的获取           以“Enteritis”为检索词，
        型串联质谱仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、             在 GeneCard 数 据 库（http：//www.genecards.org/）和
        AB265-S 型电子分析天平（瑞士 Mettlre Toledo 公司，精              OMIM 数据库（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov）中进行搜
        确度 0.01 mg）、Sangon Biotech 微型涡旋混合仪[生工生              索，合并结果、去除重复后，获取肠炎的相关靶点。
        物工程（上海）股份有限公司]等。                                    2.4.3  复方仙鹤草肠炎胶囊治疗肠炎的主要有效成分
        1.2  主要药品与试剂                                        的确定     使用 R 语言 4.0.2 将“2.4.1”项下活性成分的潜
            复方仙鹤草肠炎胶囊（批号171202，规格每粒0.4 g）                   在靶点和肠炎相关靶点进行匹配，获得两者的共同靶
        购自云南金碧制药有限公司，甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱                          点。使用Cytoscape 3.7.1软件构建“成分-靶点-疾病”网
        纯）均购自德国 Merck 公司；其余试剂均为分析纯或实                        络。该网络中以节点（Node）分别代表药物、成分、靶点
        验室常用规格，水为超纯水。                                       与疾病，用边线（Edge）表示上述节点的关联。同时，将
        2 方法                                                共同靶点的对应成分与“2.3”项下复方仙鹤草肠炎胶囊
        2.1  色谱条件                                           甲醇提取物中的化学成分进行匹配，获取该制剂治疗肠
            以 Agilent SB-C18 （2.1 mm×100 mm，1.8 µm）为色谱      炎的主要有效成分。
        柱，以 0.1％甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行洗                       2.4.4  复方仙鹤草肠炎胶囊治疗肠炎的关键靶点的确
        脱梯度（0～9.00 min，5％B→95％B；9.00～10.00 min，             定   将“2.4.3”项下的共同靶点导入 STRING 数据库
        95％B；10.00～11.10 min，95％B→5％B）；流速为 0.35            （https：//string db.org/），物种定义为“Homo sapiens”，使
        mL/min，柱温为40 ℃，进样量为2 µL。                            用 Cytoscape 3.7.1 软件构建蛋白质-蛋白质相互作用
        2.2 质谱条件                                           （PPI）网络，以综合得分评价相关性，获取相关性排序前
            离 子 源 为 电 喷 雾 离 子 源（ESI），离 子 源 温 度 为            30 位的蛋白，统计其节点度值（Degree），度值越大表示
                                                                                 [7]
        550 ℃；采用多反应监测（MRM）进行正负离子扫描；喷                        对应蛋白的贡献度越大 。以度值进行排序，获取前 10
        雾电压为 5 500 V，气帘气压力为 30 psi；碰撞诱导电离                   位的靶点作为复方仙鹤草肠炎胶囊治疗肠炎的关键
        参数设置为高，且在三重四极杆质谱中，每个离子对均                            靶点。
        根据优化的去簇电压和碰撞能进行扫描检测。                                3 结果
        2.3 复方仙鹤草肠炎胶囊甲醇提取物的化学成分分析                           3.1 复方仙鹤草肠炎胶囊甲醇提取物中的化学成分
            精密称取复方仙鹤草肠炎胶囊内容物100 mg，溶解                           复方仙鹤草肠炎胶囊的总离子流图（TIC）和典型
        于甲醇 1.2 mL 中，于 4 ℃下静置过夜，并于期间涡旋 30                   MRM图见图1。
        s×6次，以提高提取率；然后以1 000×g离心10 min，吸取                       图1C、1D展示了供试品中能够被检测到的物质，通
        上清液，用 0.22 µm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试                      过与 MWDB 数据库比对，共初筛出化合物 252 个，包括


        ·928 ·   China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8                                   中国药房    2021年第32卷第8期
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