Page 88 - 《中国药房》2021年07期
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and Bax in limonin groups were increased significantly（P＜0.05）. CONCLUSIONS：Limonin can inhibit tumor growth in MFC
        gastric cancer bearing model mice，and the side effects are relatively weak. Its mechanism is related to the improvement of immune
        function and the induction of apoptosis.
        KEYWORDS     Limonin；MFC gastric cancer cell；Immune function；Apoptosis；Mice


            胃癌是一种严重威胁人类生命的致死性疾病，由于                          IFN-γ酶联免疫吸附法（ELISA）检测试剂盒（南京建成生
                                                      [1]
        其发病隐匿、早期症状不明显，确诊时通常已是晚期 。                           物 工 程 研 究 所 ，批 号 分 别 为 20190817、20191025、
        手术是目前治疗胃癌的首选手段，但对于晚期胃癌患                             20190912），逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex Taq      TM  Ⅱ试
        者，术后仍易复发和转移，且远期疗效差，因此进行药物                           剂盒（日本Takara公司，批号分别为RR047A、RR820A），
        治疗必不可少 。现有的化疗药物耐受性差、副作用明                            兔抗鼠Cyt-C、Bcl-2、Bax、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）
                     [2]
        显 ，故寻找副作用小且有效的抗肿瘤新药是当前研究                            多克隆抗体（美国 Abcam 公司，批号分别为 ab216971、
          [3]
        者关注的热点问题。                                           ab182858、ab32503、ab9485），辣根过氧化物酶标记的羊
            柠檬苦素存在于芸香科及楝科的多种植物中，同时                          抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（广州赛国生物科技有限
        也是中药白鲜皮、黄柏等的主要成分之一，具有抗肿瘤、                           公司，批号2019122401）；其余试剂为实验室常用试剂或
        抗炎、镇痛、神经保护、抗菌、抗病毒、抗氧化及保肝等生                          规格，水为纯净水。
        物学活性     [4－6] 。相关研究表明，柠檬苦素能有效抑制胃                   1.3 动物
        癌细胞的转移，其作用机制可能是通过阻断转录激活因                                本研究所用动物为SPF级BALB/c小鼠，6～8周龄，
        子 3（STAT3）信号转导通路的活化来发挥抗肿瘤作                          雌雄各半，体质量（20±2）g，购自上海南方模式生物科
          [7]
        用 。当 STAT3 信号转导通路被抑制时，可引起肿瘤细                        技股份有限公司，动物生产许可证号为SCXK（沪）2019-
        胞凋亡，并改善机体的免疫功能             [8－9] 。                  0002。小鼠于湿度（50±10）％、温度（22±2）℃的条件
            在肿瘤的发生与进展中，T 淋巴细胞介导的细胞免                         下饲养，自由饮水及饮食，适应性饲养1周后用于实验。
                       [10]
        疫具有重要作用 ；同时，白细胞介素 2（IL-2）、IL-10 及                   1.4  细胞
        干扰素γ（IFN-γ）等免疫细胞因子的表达，有助于机体抗                            本研究所用细胞为小鼠 MFC 胃癌细胞株，购于武
        肿瘤免疫功能的形成          [11－12] 。此外，肿瘤细胞凋亡进程受            汉普诺赛生命科技有限公司。
        阻，也是导致肿瘤发生的又一重要因素，而细胞色素 C                           2 方法
        （Cyt-C）、B淋巴细胞瘤2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白                 2.1  细胞培养
        （Bax）等凋亡相关因子直接影响着肿瘤细胞的凋亡进                               将 MFC 胃癌细胞从液氮中取出，立即放于 37 ℃恒
          [13]
        程 。基于此，本研究通过探讨柠檬苦素对MFC胃癌荷                           温水浴锅中解冻，再转移至离心管中，加入含 10％胎牛
        瘤模型小鼠免疫功能及凋亡相关因子表达的影响，以期                            血清的 DMEM 培养基（以下简称“培养基”）适量，以
        进一步阐明柠檬苦素抗胃癌作用的潜在机制，为其应用                            1 500 r/min 离心 5 min，弃上清液；细胞沉淀用培养基重
        于临床奠定基础。                                            悬后，于37 ℃、5％CO2孵育箱中进行常规培养及传代。
        1 材料                                                2.2  造模、分组及给药
        1.1  主要仪器                                               将 MFC 胃癌细胞培养至对数生长期后，调整细胞
                                                                        6
            本研究所用主要仪器有：HBS-1096C型酶标分析仪                      密度为1.5×10 mL 。取0.2 mL细胞悬液接种于小鼠的
                                                                            －1
                                                                                                         [14]
        （南京德铁实验设备有限公司）、CytoFLEX 型流式细胞                       右侧腋下，当瘤块直径达到0.5 cm时，表明造模成功 。
        仪（美国Beckman Coulter公司）、QuantStudio 型实时荧             造模成功后，随机分为模型组、环磷酰胺组（阳性对照，
                                              TM
        光定量聚合酶链式反应（PCR）系统（美国Thermo Fisher                   25 mg/kg，剂量参考文献[15]进行设置）和柠檬苦素高、
        Scientific公司）、MP-9030 型蛋白电泳及转印仪（北京凯                 中、低剂量组（100、50、25 mg/kg，剂量参考文献[16]进行
        元信瑞仪器有限公司）、F3 型全自动荧光与可见光凝胶                          设置），每组10只。除模型组灌胃0.5％羧甲基纤维素钠
        成像分析系统（英国Syngene公司）。                                外，其余各组灌胃相应药物（临用时用0.5％羧甲基纤维
        1.2 主要药品与试剂                                         素钠溶解为混悬液），灌胃体积均为20 mL/kg，每天1次，
            本研究所用主要药品与试剂有：柠檬苦素（成都德                          连续14 天。
        思特生物技术有限公司，批号 20190519，纯度 95％），环                    2.3 小鼠体质量、脾指数、胸腺指数及抑瘤率的测定
        磷酰胺片（通化茂祥制药有限公司，批号 18121001，规                           各组小鼠给药前及末次给药后均称体质量并记
        格 50 mg），胎牛血清、DMEM 培养基及磷酸盐缓冲液                       录。末次给药后的次日，采用颈椎脱臼法处死小鼠，分
        （PBS）（美 国 Gibco 公 司 ，批 号 分 别 为 10091-148、           别剥离其脾脏、胸腺及肿瘤组织，称质量，并计算脾指数、
        C11885500BT、C10010500BT），兔抗鼠 CD4 （FITC 标            胸腺指数及抑瘤率。计算公式如下：脾指数（mg/g）＝脾
                                               +
                +
        记）、CD8（PE标记）多克隆抗体（美国eBioscience公司，                  质量/体质量；胸腺指数（mg/g）＝胸腺质量/体质量；抑瘤
        批号分别为 E-AB-F1097S、E-AB-F1104Q），IL-2、IL-10、          率（％）＝（模型组肿瘤组织质量－药物处理组肿瘤组织


        ·846 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7                                    中国药房    2021年第32卷第7期
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