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r＜0               r＞0                          组小鼠体内的葡萄糖水平显著降低，而L-苯丙氨酸水平
                                                      1
                                               WBC
                                               NE   r＜0     显著升高，说明环磷酰胺可引起苯丙氨酸的生物合成发
          r＞0                                  LY     0.5                     [21，29]
                                               MO           生变化，与文献结果            基本一致。在给予黄芪注射液
                                               1      0
                                               2            后，小鼠体内 L-苯丙氨酸水平显著降低，说明黄芪注射
                                               3      －0.5
                                               4            液可通过作用于苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成
                                               5            及苯丙氨酸代谢通路，发挥治疗白细胞减少症的作用。
                                               6
                                               7            3.3 血常规指标与差异代谢物的相关性
                                               8
                                               9                白细胞减少症以体内WBC低于4.0×10 L 为诊断
                                                                                                 9
                                                                                                    －1
                                               10
          r＜0                                  11   r＞0     标准。本研究的血常规检测结果显示，模型组小鼠的
                                               12
                                               13           WBC、NE、LY、MO 计数均显著减少，说明模型复制成
                                               14
                                               15           功；给予黄芪注射液后，药物组小鼠上述血常规指标均
                                               16
                                               17           显著增加，说明黄芪注射液有升高白细胞的作用。本研
                                               18
                                               19           究对各组小鼠的血清样品进行LC-MS代谢组学分析，共
                                               20
                                               21           鉴定出差异代谢物21个，与正常组比较，模型组小鼠血
            WBC  NE  LY  MO  1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  16  17  18  19  20  21  清中亚精胺、葡萄糖、尿酸、芥酰胺等4个差异代谢物的
             r＜0               r＞0
           图7 血常规指标与差异代谢物的相关性分析结果                           含量显著下降；相关性分析显示，下降的差异代谢物含
        Fig 7 Correlation analysis results of rountine blood  量与血常规指标水平呈正相关（r普遍大于0），说明血常
               indexes and differential metabolites         规的检测结果与代谢组学的检测结果一致，一定程度上
                                                            验证了代谢组学结果的可靠性。
        用白细胞减少症动物模型，考察了给药剂量分别为 3×
                                                            3.4  NMR代谢组学结果与LC-MS代谢组学结果比较
        10 、4×10 、5×10 的黄芪注射液升高白细胞的作用。
                        －3
                 －3
          －3
                                                                本课题组前期采用NMR代谢组学方法研究黄芪注
        实验结果显示，3个剂量组均有升高白细胞的作用，因此
                                                            射液升高白细胞的作用机制，找到了差异代谢物19个，
        在本实验中选择了 4×10         －3  mL/（g·d）的给药剂量，即每
                                                            共涉及 7 条代谢通路 。LC-MS 代谢组学与 NMR 代谢
                                                                              [15]
        日给药剂量为0.04 mL/10 g。
                                                            组学分析结果相比，有能被两种方法同时检出的差异代
        3.2  黄芪注射液升高白细胞的代谢通路分析
                                                            谢物（如葡萄糖、甜菜碱、异亮氨酸等），也有只能通过单
        3.2.1  亚油酸代谢       亚油酸和油酸是组成细胞膜的主                   一方法检出的差异代谢物（如乳酸、肌酸、赖氨酸、精氨
        要成分，其含量升高可能与造血干细胞的坏死和凋亡有                            酸等只能被 NMR 法检出，亚油酸、D-鞘氨醇只能被
                 [24]
        一定关系 。本研究使用环磷酰胺造模后，发现模型组                            LC-MS 法检出）。可见，两种代谢组学方法结合使用将
        小鼠体内亚油酸含量显著升高，这一结果与文献结
                                                            有助于更全面地筛选环磷酰胺致白细胞减少的差异代
        果 [25-27] 基本一致，说明环磷酰胺可通过作用于亚油酸代                     谢物。两种代谢组学方法分析结果均涉及到了 TCA 和
        谢途径而引起白细胞减少。给予黄芪注射液后，小鼠体                            半乳糖代谢，同时也涉及到了其余不同的代谢途径，亦
        内的亚油酸含量显著降低，提示黄芪注射液可回调小鼠                            可将这两种方法互为补充。
        亚油酸水平，这种回调作用可能与亚油酸代谢通路                                  综上所述，本研究采用LC-MS代谢组学的方法对黄
        有关。                                                 芪注射液干预环磷酰胺致小鼠白细胞减少症的作用机
        3.2.2  苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成以及苯丙                        制进行了研究，确定了模型小鼠血清中 21 个差异代谢
        氨酸代谢       氨基酸是蛋白质的重要组成部分，氨基酸代                      物，阐明了黄芪注射液升高白细胞的作用机制可能是与
        谢在氨基酸的生物合成和代谢中起着重要作用，是细胞                            亚油酸代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的合成以及苯
        增殖、生存和发育的必经途径             [15，21] 。已有研究报道，调节        丙氨酸代谢等通路有关。本研究结果可与之前NMR代
        氨基酸代谢可作为治疗白细胞减少症的手段之一                       [15，21] 。  谢组学的结果相互补充，能更全面地阐明黄芪注射液治
        苯丙氨酸是人体必需的芳香族氨基酸之一，在正常情况                            疗白细胞减少症的作用机制，为该制剂在临床上用于肿
        下可以作为氨基酸残基在人体组织细胞中参与合成各                             瘤辅助治疗提供更充分的实验依据。在后续的研究中，
        种蛋白质，其也可在肝脏中产生酪氨酸，而酪氨酸可促                            本课题组将采用 Western blotting 等方法检测前文所得
        进某些激素和神经递质（如多巴胺、肾上腺素和去甲肾                            代谢通路中一些关键代谢物的表达情况，对上述代谢组
                      [28]
        上腺素）的分泌 。有研究指出，肝脏和肾脏疾病和免                            学分析结果进行验证。
        疫力、神经体液、遗传和其他因素都有可能引发苯丙氨                            参考文献
        酸代谢疾病，因此苯丙氨酸代谢的稳定状态有助于人体                            [ 1 ]  卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准：中药成方制
                                     [29]
        正常生长发育和生理机能的维持 。本研究发现，模型                                 剂：第17册[S].北京：人民卫生出版社，1998：256.

        ·2632 ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 21                                 中国药房    2020年第31卷第21期
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