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水）和灵芝多糖粗提物高、低剂量组（400、100 mg/kg，以 间两两比较采用 LSD-t 检验。P＜0.05 为差异具有统计
生药量计） 。模型组和灵芝多糖粗提物高、低剂量组小 学意义。
[7]
鼠隔天腹腔注射苯甲酸雌二醇注射液（0.1 mg/只）1 次， 3 结果
共注射 6 次（造模用时 11 d）；正常对照组小鼠不作任何 3.1 小鼠脏器质量和脏器指数测定结果
实验操作。于造模完成后次日开始给药，每天给药1次， 与正常对照组比较，模型组小鼠胸腺质量、胸腺指
连续给药14 d。 数均显著降低（P＜0.01），脾质量和脾指数均显著升高
2.3 取材与样本处理 （P＜0.05）。与模型组比较，灵芝多糖粗提物高剂量组
末次给药24 h后，称定小鼠体质量并从眼内眦取血 小鼠胸腺质量、胸腺指数显著升高（P＜0.01）。各组小
（约0.5 mL），将血样置于乙二胺四乙酸二钾（EDTA-2K） 鼠胸腺、脾质量及其脏器指数测定结果见表1。
抗凝管中，涡旋摇匀，备用。取血后将小鼠脱颈椎处死， 表 1 各组小鼠胸腺、脾质量及其脏器指数测定结果
取出胸腺和脾，称质量，将胸腺和脾组织置于福尔马林 （x±±s，n＝15）
溶液中固定，用于后续病理学检测。 Tab 1 Thymus and spleen weight and the organic in-
2.4 小鼠脏器指数测定 dex of mice in each group（x±±s，n＝15）
根据“2.3”项下测定的末次给药 24 h 后小鼠体质量 组别 胸腺质量，mg 胸腺指数，mg/g 脾质量，mg 脾指数，mg/g
和脏器（胸腺、脾）质量计算其脏器指数：脏器指数＝脏 正常对照组 67.13±11.27 2.37±0.59 120.26±24.31 4.41±0.45
模型组 38.55±1.145 ＊＊ 1.49±0.46 ＊＊ 141.17±19.16 ＊ 4.83±0.51 ＊
器（胸腺、脾）质量（mg）/末次给药24 h后体质量（g）。
灵芝多糖粗提物高剂量组 52.41±18.72 ## 2.03±0.57 ## 143.74±18.69 4.92±0.52
2.5 小鼠血浆中MDA含量和GST活性检测 灵芝多糖粗提物低剂量组 42.11±21.25 1.63±0.62 138.25±27.24 4.78±0.68
取适量抗凝血，以 3 000 r/min 离心 15 min，然后取 注：与正常对照组比较， P＜0.05， P＜0.01；与模型组比较，
＊
＊ ＊
上层血浆，根据相应试剂盒说明书操作，检测血浆中 ## P＜0.01
＊
＊ ＊
MDA含量和GST活性。 Note：vs. normal control group， P＜0.05， P＜0.01；vs. model
group，P＜0.01
##
2.6 小鼠胸腺、脾组织的病理学变化观察
3.2 小鼠血浆中MDA含量和GST活性检测结果
将小鼠胸腺、脾组织置于福尔马林溶液中固定 1 周
与正常对照组，模型组小鼠血浆中 MDA 含量显著
后取出，常规制作石蜡切片（厚度5 μm），行苏木精-伊红
升高（P＜0.01）。与模型组比较，灵芝多糖粗提物高、低
（HE）染色，然后于显微镜下观察胸腺和脾组织的病理
剂量组小鼠血浆中MDA含量均显著降低（P＜0.01），且
学变化。
灵芝多糖粗提物高剂量组小鼠血浆中 GST 活性显著升
2.7 小鼠胸腺细胞凋亡检测
高（P＜0.05）。各组小鼠血浆中 MDA 含量与 GST 活性
采用TUNEL法进行检测。取“2.6”项下各组小鼠胸
检测结果见表2。
腺组织石蜡切片（每组选3个组织样本），置于防脱载玻
表2 各组小鼠血浆中MDA含量与GST活性检测结果
片上，55 ℃下烤片 2 h，然后按照 TUNEL 凋亡检测试剂
（x±±s，n＝15）
盒（显色法）说明书进行操作，检测胸腺组织中胸腺细胞
Tab 2 MDA content and GST activity in plasma of
的凋亡情况（镜下可见凋亡细胞被染色成棕褐色）。使
mice in each group（x±±s，n＝15）
用 Image J 1.52a 软件根据阳性染色面积进行半定量分
组别 MDA，nmol/mL GST，U/mL
析。每个组织随机选取2个面积相同的视野并计算选择
正常对照组 3.88±1.28 1.05±0.22
视野下阳性染色面积的相对面积百分比（即阳性染色面 模型组 7.63±2.29 ＊＊ 1.14±0.24
积占总面积的百分比），用来表示细胞凋亡水平。 灵芝多糖粗提物高剂量组 4.13±1.59 ## 1.46±0.32 #
灵芝多糖粗提物低剂量组 5.45±1.62 ## 1.22±0.31
2.8 小鼠外周血中T细胞分类检测
##
#
注：与正常对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
＊＊
取 100 μL 小鼠抗凝血（每组取 10 个样本进行测
0.01
定），加入CD3-APC、CD4-PE、CD8-FITC荧光抗体，充分 Note：vs. normal control group， P＜0.01；vs. model group，P＜
#
＊ ＊
混匀，室温下避光孵育 15 min。孵育结束后，加入 1 mL 0.05，P＜0.01
##
红细胞裂解液，混匀，室温下避光处理 15 min，然后以 3.3 小鼠胸腺和脾组织病理学变化观察结果
500×g离心5 min，弃去上清液；加入1 mL常温无菌磷酸 3.3.1 胸腺组织 正常对照组小鼠胸腺组织皮质髓质
盐缓冲液（PBS）清洗后，再次以 500×g 离心 5 min，弃去 分界明显，皮质区淋巴细胞排列整齐，髓质区可见胸腺
上清液；加入 0.5 mL 常温无菌 PBS 重悬后，采用流式细 小体。模型组小鼠胸腺组织皮质变薄，其中胸腺细胞数
胞仪进行检测，分析外周血中T细胞亚群比例。 明显减少、结构疏松，细胞间隙增大，可见大量网状上皮
2.9 统计学方法 细胞，皮质分界较为模糊。灵芝多糖粗提物高剂量组小
采用 SPSS 20.0 软件进行数据分析。计量资料以 鼠胸腺组织皮质与髓质分界较为清晰，细胞排列规整。
x±s 表示，多样本均数间比较采用单因素方差分析，组 灵芝多糖粗提物低剂量组小鼠胸腺组织病理学变化虽
中国药房 2020年第31卷第17期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 17 ·2137 ·