Page 73 - 《中国药房》2026年7期
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2.3.2 脑组织与脑脊液样本预处理                                 离心管（供血样本通过蠕动泵以0.3 mL/min的流速输入
              精密称取大鼠脑组织样本适量，按照质量比1∶10加                       颈静脉）；沿大鼠腹中线开腹，选取靠近十二指肠的空肠
          入预冷提取溶剂（由70%乙腈和30%生理盐水组成），匀                        段（约10 cm）作为供试肠段，以37 ℃生理盐水冲洗肠腔
          浆3 min；于4 ℃条件下以10 000 r/min离心10 min，收集             至流出液澄清，确认肠内无内容物后，注入空气排净残

          上清液，用氮吹仪去除溶剂后，以 300 μL 50% 甲醇复                     留液体；在供试肠段两端置入玻璃导管建立药物灌流通
          溶，再于 4 ℃条件下以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清            道（木姜叶柯叶灌流液通过注射泵以恒定流速0.2 mL/min
          液，即得脑组织检测样本。                                       灌注），结扎肝门静脉与供试肠段外的肠系膜旁支血管，
              将收集到的脑脊液样本加入等体积冰乙腈，涡旋 2                        并在肠系膜静脉处插入静脉留置针，再通过蠕动泵连接
          min 以沉淀蛋白，再同上述方法离心、复溶后，即得脑脊                        干净的离心管用于收集血液。空白组以生理盐水代替
          液检测样本。                                             木姜叶柯叶灌流液，其余操作相同。全程持续供血、采
          2.4 色谱与质谱条件                                        血2 h，将采集的全血样本按“2.3.1”项下方法处理，再按
          2.4.1 色谱条件                                        “2.4”项下色谱与质谱条件进样分析。
              采用 Acquity UPLC BEH Shield RP 18 色谱柱（100       2.6.2 肠道菌代谢全血样本的制备与分析
          mm×2.1 mm，1.7 µm），以乙腈（A）-0.1% 甲酸溶液（B）                  将 10 只健康雄性 SD 大鼠按“2.6.1”项下方法分组。
          为流动相进行梯度洗脱（0～2 min，95%B→75%B；2～                    将大鼠麻醉后，选取距盲肠远端约8 cm的结肠段作为供
          3.5  min，75%B；3.5～5  min，75%B→72%B；5～6  min，       试肠段，采用注射器将木姜叶柯叶灌流液或生理盐水匀

          72%B；6～7  min，72%B→60%B；7～8  min，60%B→             速注入肠腔，待药液完全充盈至肠段末端后，移除注射
          10%B；8～10  min，10%B；10～11  min，10%B→95%B；          器，结扎肠段两端，其余操作同“2.6.1”项下。全程持续

          11～15 min，95%B）；流速为 0.3 mL/min；柱温为 35 ℃；           供血、采血2 h，将采集的全血样本按“2.3.1”项下方法处
          进样体积为5 μL。                                         理，再按“2.4”项下色谱与质谱条件进样分析。
          2.4.2 质谱条件                                         2.6.3 肝代谢全血样本的制备与分析
              采用加热电喷雾离子化源（HESI），在正、负离子模                          将 10 只健康雄性 SD 大鼠按“2.6.1”项下方法分组、
          式下进行检测，扫描范围为m/z 100～1 200，喷雾电压分                    操作，除木姜叶柯叶组和空白组大鼠采血位点改为股静
          别为3.8、－3.2 kV，辅助气温度为300 ℃，离子传输管温                   脉且不结扎肝门静脉外，其余实验操作相同。全程持续
          度为350 ℃，鞘气、辅助气体积流量分别为35、15 arb；扫                   供血、采血2 h，将采集的全血样本按“2.3.1”项下方法处
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          描模式为Full MS/dd-MS ，其中Full MS分辨率为70 000，            理，再按“2.4”项下色谱与质谱条件进样分析。
               2
          dd-MS 分辨率为17 500，碰撞能设置为20、40、60 eV。                2.6.4 综合代谢全血样本的制备与分析
          2.5 木姜叶柯叶化学成分分析                                        取3只健康雄性SD大鼠，连续灌胃木姜叶柯叶灌胃
              取“2.1”项下木姜叶柯叶醇提物适量，按“2.4”项下                    液3次，每次3 mL（间隔4 h）；于末次灌胃结束后0.5、1、
          色谱与质谱条件进样分析，记录总离子流图；然后基于                           1.5 h 时进行腹主动脉采血，合并所有时间点的全血样
          对照品与文献报道信息，构建包含化合物名称、分子式、                          本。另取3只大鼠作为空白组，以等体积生理盐水替代
          相对出峰顺序、准分子离子及二级碎片等信息的专属数                           药液，其余操作相同。将所有全血样本按“2.3.1”项下方
          据库，并利用 Xcalibur 4.0 软件进行精确质量数匹配，以                  法处理，再按“2.4”项下色谱与质谱条件进样分析。
          鉴定木姜叶柯叶的化学成分。                                      2.7 木姜叶柯叶原型入脑成分分析
          2.6 木姜叶柯叶原型入血成分分析                                     “2.6.4”项下大鼠取血完成后，通过心脏灌注生理盐
          2.6.1 肠壁代谢全血样本的制备与分析                               水的方式清除脑内残留血液，采用枕骨大孔穿刺法采集

              将 10 只健康雄性 SD 大鼠随机分为供血组（8 只）、                  脑脊液；处死大鼠，剖取脑组织。将所有脑脊液和脑组
          木姜叶柯叶组（1 只）与空白组（1 只），实验前禁食 12 h                    织按“2.3.2”项下方法处理，再按“2.4”项下色谱与质谱条
         （自由饮水）。供血组大鼠经异氟烷吸入（4%诱导麻醉，                          件进样分析。
          2%维持麻醉，下同）麻醉后，于腹主动脉采血，采集的血                         3 结果
          样置于 37 ℃恒温水浴锅中，用于补充木姜叶柯叶组或                         3.1 木姜叶柯叶化学成分分析结果
          空白组大鼠损失的血液。木姜叶柯叶组大鼠同法麻醉                                本研究从木姜叶柯叶中共鉴定出66个化合物，主要
          后，剥离颈静脉，插入静脉留置针，并连接蠕动泵与供血                          为黄酮类、有机酸及其衍生物类、三萜类化合物等。木


          中国药房  2026年第37卷第7期                                                 China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 7    · 891 ·
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