Page 72 - 《中国药房》2026年7期

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明，木姜叶柯叶富含黄酮类成分，具有调节血糖 、保护 23092801，纯度不低于 98%）购自北京倍特仁康生物医
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神经 、抗炎 、保肝 、抗衰老与抗氧化应激 等药理作 药科技有限公司；柚皮素对照品（批号 3978，纯度 98%）
用。木姜叶柯叶的活性成分三叶苷具有减轻阿尔茨海 购自上海麦克林生化科技股份有限公司；黄芩素对照品
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默病认知损伤 与修复血脑屏障功能障碍 等作用，其 （批号 C15199672，纯度不低于 98%）购自上海诗丹德标
苷元根皮素也被报道能够在帕金森病模型小鼠中发挥 准技术服务有限公司；异氟烷（批号为2025032601）购自
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神经保护作用 。由此可见，木姜叶柯叶在中枢神经系 深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司；水为娃哈哈纯净
统（central nervous system，CNS）疾病防治方面具有潜在 水，乙腈、甲酸均为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
的应用价值，然而其具体药效物质基础尚不明确。 1.3 实验动物
药物常以口服途径给药，其在体内的吸收代谢过程 本研究所用动物为SPF级SD雄性大鼠，体重200～
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具有空间序贯性、时间并发性与反应多重性等特点 。 220 g，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，动物生产
入脑成分分析可以直接揭示药物穿透血脑屏障的化学 许可证号为 SCXK（京）2024-0001。大鼠饲养于相对湿
成分，然而仅检测入脑成分无法阐明口服药物在体内不
度 50%～70%、温度 25～27 ℃、12 h/12 h 昼夜节律光照
同消化道部位的动态代谢细节，因此结合入血成分分析 条件下，实验前适应性饲养7 d，自由进食进水。本实验
追踪药物化学成分在胃肠道、肝脏及体循环中的动态移
获得北京中医药大学医学与实验动物伦理委员会批准
行情况，能为入脑成分的来源提供依据。序贯代谢方法
（伦理审批号为BUCM-4-2022061502-2062）。
作为研究药物动态代谢过程的重要手段，在传统入血成
2 方法
分分析的基础上，结合在体肠灌流法和封闭肠环法，能
2.1 木姜叶柯叶醇提物以及灌胃液、灌流液的制备
够全面、连续地表征药物口服后在空间和时间上的动态
取木姜叶柯干燥叶片适量，加入20倍量50%乙醇，
吸收代谢过程 [12―13] 。基于此，本研究采用序贯代谢方
超声提取 30 min（频率 40 kHz，功率 200 W），提取 2 次，
法，结合超高效液相色谱-高分辨质谱（ultra performance
合并提取液。取适量提取液用 50% 乙醇稀释 2 倍，过
liquid chromatography-high resolution mass spectrometry，
0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得木姜叶柯叶醇提物，
UPLC-HRMS）技术，分析鉴定木姜叶柯叶的化学成分及
用于 UPLC-HRMS 分析。另取提取液适量，置于 50 ℃
其在大鼠体内的入血及入脑成分，以期为明确木姜叶柯
水浴锅中挥干乙醇至稠膏状，用 0.5% 羧甲基纤维素钠
叶防治CNS疾病的药效物质基础提供参考。
溶解制成质量浓度为 1 g/mL（以生药量计）的木姜叶柯
1 材料
叶灌胃液（灌流液）。
1.1 主要仪器
2.2 对照品溶液的制备
本研究所用主要仪器有 HH-2A 型电热恒温水浴锅
分别取三叶苷、根皮素对照品适量置于同一 2 mL
（北京科伟永兴仪器有限公司），1-15PK型高速冷冻离心
离心管中，加入甲醇溶解并用 5 mL 容量瓶定容，混匀，
机（德国Sigma公司），BSA124S型万分之一电子分析天
制成两成分质量浓度均为 0.5 mg/mL 的混合对照品母
平（德国Sartorius公司），BT-100-1F型蠕动泵、LSP02-1B
液；取该母液 200 μL 置于 5 mL 容量瓶中，加甲醇定容，
型注射泵（保定兰格恒流泵有限公司），CM-12型氮吹仪
过 0.22 μm 微孔滤膜，取续滤液，即得混合对照品 A 溶
（北京成萌伟业科技有限公司），Vanquish型UPLC系统、
Q Exactive Plus 型超高分辨液质联用系统、Xcalibur 4.0 液。另取 L-苯丙氨酸、金丝桃苷、根皮苷、槲皮素、柚皮
型质谱工作站（美国Thermo Fisher Scientific公司）。 素、黄芩素、山柰酚对照品各适量，配制方法同混合对照
1.2 主要药品与试剂 品A溶液，即得混合对照品B溶液。
木姜叶柯叶（批号为 LK50-016-002/20240528）购于 2.3 样本预处理
重庆市梁平区平甜茶叶种植专业合作社，经北京中医药 2.3.1 全血样本预处理
大学王晶娟教授鉴定为壳斗科植物木姜叶柯 L. litseifo‐ 将采集的大鼠全血样本置于含肝素钠的离心管中，
lius （Hance） Chun的干燥叶片。三叶苷、根皮素、L-苯丙 于 4 ℃条件下以 3 500 r/min 离心 15 min，分离获得上层
氨酸、槲皮素、山柰酚对照品（批号分别为J03GB153516、 血浆。将血浆与等体积预冷乙腈混合，涡旋 2 min 充分
21030810、J04J7R8481、C20J6Y1722、C26J8Y38642，纯 沉淀蛋白质，再于 4 ℃条件下以 10 000 r/min 离心 10
度均不低于 98%）均购自上海源叶生物科技有限公司； min，收集上清液。取适量上清液，用氮吹仪去除有机溶
金丝桃苷对照品（批号 D21041311，纯度不低于 98%）购 剂后，以300 μL 50%甲醇复溶，再于4 ℃条件下以12 000
自南京狄尔格医药科技有限公司；根皮苷对照品（批号 r/min离心10 min，取上清液，即得全血检测样本。

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