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2.4 方法学考察 啡酰基莽草酸、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、
2.4.1 线性关系考察 异落新妇苷、黄杞苷、白藜芦醇、异黄杞苷的质量浓度分
精密吸取“2.1”项下混合对照品溶液 0.5、1、2、5、10 别 为 2.055、0.085、2.414、0.092、0.890、0.029、0.025、
mL，分别置于不同10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至 0.042 mg/mL），按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按
刻度，摇匀，即得系列混合对照品溶液；精密吸取上述溶 “2.3”项下色谱条件进样测定。结果显示，各成分的平均
液各 2 μL，按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面 加 样 回 收 率 分 别 为 101.82%、100.00%、104.12%、
积。以对照品的质量浓度（x）为横坐标、峰面积（y）为纵 103.44%、97.60%、102.30%、106.40%、102.78%，RSD 分
坐标进行线性回归，具体结果见表2。 别为1.92%、1.97%、0.73%、1.55%、1.61%、1.74%、1.94%、
表2 5-O-咖啡酰基莽草酸等 8 个待测成分的线性关系 1.74%（n＝6），表明该方法准确度良好。
考察结果 2.5 样品含量测定
成分 回归方程 r 线性范围/（μg/mL） 取收集到的 20 批土茯苓样品，按“2.2”项下方法制
5-O-咖啡酰基莽草酸 y＝15 434x－1 024.8 0.999 9 0.749～14.980 备供试品溶液，再按“2.3”项下色谱条件进样分析，然后
新落新妇苷 y＝12 853x－703.63 0.999 9 0.901～18.020 根据外标法计算各成分含量，每批样品平行测定3次，取
落新妇苷 y＝12 094x－4 078.7 0.999 6 8.510～170.200
新异落新妇苷 y＝9 082.9x－491.98 0.999 7 0.807～16.140 平均值，结果见表3。由表3可知，所有批次土茯苓样品
异落新妇苷 y＝12 609x－350.07 0.999 9 0.556～11.120 中落新妇苷的含量均为最高。不同产地土茯苓中化学
黄杞苷 y＝12 261x+1 368.6 0.999 7 1.161～23.220 成分含量差异较大，其中云南产土茯苓中落新妇苷的含
白藜芦醇 y＝35 059x－1 439.7 0.999 8 0.408～8.150
异黄杞苷 y＝11 576x－397.19 0.999 7 0.669～13.380 量为 28.618～43.112 mg/g，远远高于其他产地样品；浙
江产土茯苓中落新妇苷的含量最低，其次为江西、湖南
2.4.2 精密度试验
产样品。云南产土茯苓中 5-O-咖啡酰基莽草酸的含量
取土茯苓药材（编号S9）粉末（过四号筛），约0.5 g，
普遍较低，为 1.545～1.802 mg/g，该成分含量最高为湖
精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3”
南产样品，为5.092～8.623 mg/g。
项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果显示，5-
表3 20批土茯苓样品中5-O-咖啡酰基莽草酸等8个成
O-咖啡酰基莽草酸、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇
分的含量测定结果（n＝3，mg/g）
苷、异落新妇苷、黄杞苷、白藜芦醇、异黄杞苷峰面积的
序号 5-O-咖啡酰基莽草酸 新落新妇苷 落新妇苷 新异落新妇苷 异落新妇苷 黄杞苷 白藜芦醇 异黄杞苷
RSD分别为0.66%、0.53%、0.41%、0.34%、0.17%、0.36%、
S1 2.035 0.924 5.087 0.126 0.651 0.128 0.144 0.028
0.42%、0.23%（n＝6），表明该方法精密度良好。 S2 1.072 0.639 3.953 0.154 0.793 0.135 0.121 0.029
2.4.3 重复性试验 S3 1.428 0.891 5.211 0.238 1.172 0.169 0.142 0.038
取同一批次（编号S9）土茯苓药材粉末（过四号筛）6 S4 2.266 0.737 3.554 0.293 1.296 0.135 0.112 0.021
S5 2.025 0.962 5.048 0.115 0.435 0.127 0.143 0.031
份，每份约 0.5 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试 S6 2.195 0.408 10.519 0.367 4.355 0.134 0.114 0.115
品溶液，再按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积， S7 5.784 0.306 7.478 0.272 5.415 0.118 0.124 0.154
并根据外标法计算各成分含量。结果显示，5-O-咖啡酰 S8 5.695 0.275 14.628 0.228 4.464 0.129 0.097 0.066
S9 8.233 0.338 9.645 0.357 3.534 0.117 0.094 0.158
基莽草酸、新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落 S10 5.321 0.346 11.818 0.383 5.475 0.243 0.098 0.164
新妇苷、黄杞苷、白藜芦醇、异黄杞苷的平均含量分别为 S11 5.754 4.594 23.672 0.262 1.776 1.137 0.194 0.234
8.225、0.341、9.638、0.359、3.531、0.119、0.093、0.159 mg/g， S12 5.092 4.612 18.645 0.566 2.728 1.125 0.229 0.393
S13 8.623 3.547 21.132 0.341 1.116 1.567 0.199 0.214
RSD分别为0.85%、0.93%、0.79%、1.12%、0.78%、0.99%、 S14 7.133 4.824 27.464 0.519 1.939 2.243 0.239 0.246
1.34%、0.69%（n＝6），表明该方法重复性较好。 S15 6.052 3.807 22.335 0.501 1.825 2.193 0.211 0.223
2.4.4 稳定性试验 S16 1.802 3.723 35.826 2.068 6.634 3.413 0.155 1.751
S17 1.552 2.802 30.987 1.905 7.909 4.938 0.181 1.567
取同一批次（编号 S9）供试品溶液，按“2.3”项下色 S18 1.545 3.843 43.112 1.234 7.614 5.432 0.172 0.946
谱条件，分别在室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时进样测 S19 1.661 2.752 38.008 1.336 6.997 4.015 0.192 0.916
定，记录峰面积。结果显示，5-O-咖啡酰基莽草酸、新落 S20 1.565 3.577 28.618 1.661 7.391 5.019 0.158 1.489
新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷、 2.6 化学计量学分析
白 藜 芦 醇 、异 黄 杞 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.45%、 2.6.1 聚类分析
0.27%、0.64%、0.39%、0.48%、0.82%、0.53%、0.25%（n＝ 将 20 批土茯苓中 8 个成分的含量数据导入 SPSS
6），表明供试品溶液在室温下放置24 h内稳定。 25.0 软件中，以欧氏距离为依据，使用组间聚类方式对
2.4.5 加样回收试验 数据进行聚类分析（cluster analysis，CA），结果见图 2。
取同一批次（编号 S9）已知各成分含量的土茯苓药 由图 2 可知，当欧氏距离为 10 时，20 批土茯苓样品可聚
材粉末（过四号筛）6份，每份约0.25 g，精密称定；分别按 为 3 类：浙江产（S1～S5）和江西产（S6～S10）样品聚为
与各成分相当的含量加入相应单一对照品溶液（5-O-咖 一类；湖南产（S11～S15）样品聚为一类；云南产（S16～

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