Page 72 - 《中国药房》2023年19期
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骨质疏松（osteoporosis，OP）是一种以低骨量和骨组                 板内皮细胞黏附分子 1（platelet endothelial cell adhesion
          织微结构破坏为特征的常见老年疾病，因其易导致骨脆                            molecule-1，PECAM-1）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）
                                                     [1]
          性增加和骨折的发生，所以OP患者的致残率较高 。目                           一 抗（ 批 号 分 别 为 ab83259、ab179483、ab214424、
          前临床上用来治疗 OP 的药物多以雌激素类药物为主，                          ab222783、ab9485）以及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔
                                           [2]
          但其会对人体产生不同程度的副作用 。因此，积极开                            IgG二抗（批号ab6721）均购自美国Abcam公司。
          发新的安全有效、副作用小的抗 OP 天然活性成分显得                          1.3 动物
          尤为重要。高良姜素（galangin，Gal）是一种天然的类黄                         本研究所用动物为 SPF 级健康雌性 SD 大鼠，共 72
          酮化合物，具有抗肿瘤、抗炎、抗糖尿病和神经保护等多                           只，8～10 周龄，体重 180～200 g，购自贵州医科大学实
                    [3]
          种药理活性 。Gal可以减缓软骨细胞外基质降解，改善                          验动物中心，生产许可证号为SCXK（黔）2018-0001。大
                                                        [4]
          骨关节炎进展，可能是治疗骨关节炎的潜在候选药物 。                           鼠饲养环境温度为 22 ℃，湿度为 55%～60%，12 h 光暗
          据报道，Gal 可诱导人骨肉瘤 MG-63 和 U-2OS 细胞的成                  循环，饲养期间自由摄食和饮水。适应性喂养1周后进
                [5]
          骨分化 。也有报道称，Gal可以通过抑制丝裂原激活蛋                          行实验。本研究获得了本院伦理委员会的批准，批准号
          白激酶（mitogen activation protein kinase，MAPK）和核因      为伦审（2022）-2-08号。
          子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号通路抑制破骨细胞              2 方法
                                       [6]
          形成，从而有效抑制 OP 的发展 。缺氧诱导因子 1α                         2.1 动物建模、分组与给药
         （hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）/血管内皮生长因             取 72 只大鼠分为造模组（n＝60）和假手术（Sham）
          子（vascular endothelial growth factor，VEGF）介导的血管     组（n＝12）。造模组大鼠采用双侧卵巢切除手术构建
          生成在骨折愈合中发挥重要作用。研究表明，HIF-1α/                         OP大鼠模型，具体操作如下：对造模组大鼠行双侧卵巢
          VEGF信号通路被激活后，HIF-1α活性增强，VEGF表达                      切除术，卵巢切除后缝合伤口。12 周后利用小动物
          升高，可促进血管生成，预防骨质流失，最终增强骨折愈                           micro-CT 检测造模大鼠的腰椎骨密度（bone mineral
          合 [7―8] 。但 Gal 是否能通过调节 HIF-1α/VEGF 信号通路             density，BMD），当造模组大鼠BMD与Sham组相比显著
          促进 OP 模型大鼠骨折愈合尚不清楚。因此，本研究基                          降低时，即表明OP大鼠造模成功。腹腔注射3%戊巴比
          于HIF-1α/VEGF信号通路探讨Gal对OP模型大鼠骨折                      妥钠（50 mg/kg）麻醉大鼠，钢锯横向切断股骨中段，并用
          愈合的影响及可能的作用机制，以期为临床治疗 OP 提                          克氏针在髓腔内固定，缝合切口，以构建骨折模型，具体
          供参考。                                                操作参考文献[9]。Sham组大鼠仅在卵巢周围结扎并切
          1 材料                                                除相当大小的脂肪组织。将造模成功的 60 只大鼠按照

          1.1 主要仪器                                            随机数字表法分成模型（Model）组和 Gal低、中、高剂量
              本研究所用主要仪器有 HBS-ScanX 型多功能全自                     组以及抑制剂组（HIF-1α/VEGF 信号通路抑制剂 PX-
          动酶标仪（南京德铁实验设备有限公司）、μCT-100型微                        478），每组 12 只。Gal 低、中、高剂量组腹腔注射 2.5、5、
                                                                           [6]
          计 算 机 断 层 扫 描（micro-computed  tomography，micro-     10 mg/kg 的 Gal ，抑制剂组腹腔注射 10 mg/kg 的 Gal 和
                                                                               [10]
          CT）设备（丹东奥龙射线仪器集团有限公司）、CX31型光                        100 mg/kg 的 PX-478 ，Sham 组和 Model 组腹腔注射等
          学显微镜（日本Olympus公司）、EPS-300型电泳仪（上海                    量生理盐水；每天1次，连续90 d。
          天能科技有限公司）、DW-86L348型超低温冰箱（青岛澳                       2.2 大鼠股骨显微结构分析
          柯玛股份有限公司）、BSA124S/BSA224S 型分析天平                         各组取 6 只大鼠麻醉处死，取出两侧股骨，漂洗干
         （德国Sartorius公司）。                                     净，进行 micro-CT。使用 VGStudio Max 2.2 软件定量分
          1.2 主要药品与试剂                                         析，获得 BMD、骨体积分数（bone volume/total volume，
              Gal对照品（批号LA1806，纯度≥98％）购自北京康                    BV/TV）、骨小梁数（trabecular number，Tb.N）、骨小梁厚
          瑞纳生物科技有限公司；PX-478（HIF-1α/VEGF 信号通                   度（trabecular thickness，Tb.Th）。
          路抑制剂，批号 M00231-CVW）购自北京百奥莱博科技                       2.3 大鼠股骨生物力学检测
          有限公司；骨钙素（osteocalcin，OCN）、Ⅰ型胶原交联 C                      将“2.2”项下大鼠左侧股骨水平放在跨度为 20 mm
          末端肽（C-terminal telopeptides of type Ⅰ collagen，CTX-  的测试仪器的 2 个支撑点上，以 10 mm/min 的速率下压
          Ⅰ）、骨形态发生蛋白 2（bone morphogenetic protein 2，          探头，至股骨中段断裂，利用仪器自带软件分析得到骨
          BMP-2）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（批号分别为                      生物力学指标最大负载。
          E-EL-R0243c 、E-EL-R1456c、E-EL-R0002c）购自武汉伊          2.4 大鼠骨组织损伤及新生血管情况检测
          莱瑞特生物科技股份有限公司；蛋白提取试剂盒（批号                                采用苏木素-伊红（HE）染色观察骨组织损伤及新生
          YT8951）购自北京伊塔生物科技有限公司；兔源碱性磷                         血管情况。取“2.2”项下大鼠的右侧股骨骨折处骨痂组
          酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、HIF-1α、VEGF、血小         织，经多聚甲醛固定、乙二胺四乙酸脱钙、梯度乙醇脱


          · 2366 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 19                            中国药房  2023年第34卷第19期
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