Page 70 - 《中国药房》2023年17期

neural function in TBI rats by inhibiting the activation of cGAS/STING signaling pathway.
KEYWORDS scutellarin； traumatic brain injury； neuroinflammation； cyclic guanylate-adenylate synthase； interferon gene
stimulating protein

创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）作为一 苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色试剂盒（北京
种由外部机械力引起的获得性脑损伤，可导致神经损 索莱宝科技有限公司，批号 20196537）；原位末端标记
伤、行为改变和认知功能下降，严重影响患者生活质量， （TdT-mediated dUTP nick-end labeling，TUNEL）细胞凋
且由于其高发病率和长期后遗症，给患者家庭和社会带 亡检测试剂盒（上海弗元生物科技有限公司，批号
[1]
来了沉重的医疗和经济负担 。尽管TBI引发的暂时性 19273185）；β 干扰素（interferon-β，IFN-β）、CXC 趋化因
或永久性损伤的治疗策略已取得了一定进展，但目前 子配体10（CXC chemokine ligand-10，CXCL10）、肿瘤坏
[2]
TBI 的有效治疗仍面临巨大挑战 ，仍需探索其发生发 死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素6
展的分子机制，从而开发更有效的治疗方案。研究显 （interleukin-6，IL-6）酶联免疫吸附检测（enzyme-linked
示，TBI后会发生急性、强烈的炎症级联反应，其特征是 immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（上海酶研生物科
小胶质细胞激活、外周免疫细胞迁移和募集、炎症介质 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 21071196、22551682、
释放等，且这些炎症介质会诱导继发性细胞死亡并阻碍 22670618、21348216）；cGAS兔多克隆抗体（美国Invitro‐
神经功能恢复，故控制TBI后炎症反应被认为是一种很 gen 公司，批号 PA5-121188）；STING、甘油醛-3-磷酸脱
有前途的治疗方法 [3―4] 。 氢酶（GAPDH）兔单克隆抗体及辣根过氧化物酶（HRP）
环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cyclic guanylate-adenylate 标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（英国 Abcam
synthase，cGAS）/干扰素基因刺激蛋白（stimulator of in‐ 公司，批号分别为ab227704、ab181602、ab205718）。
terferon genes，STING）信号通路是先天免疫系统中重要 1.3 动物
的模式识别及效应通路之一，能够识别存在于细胞质的 本研究所用动物为SPF级健康雄性SD大鼠，共124
异常 DNA 分子，进而诱导Ⅰ型干扰素（interferon type 只，7～8周龄，体重240～280 g，购自湖北省实验动物研
[5]
Ⅰ，IFN-Ⅰ）和其他炎症因子表达 。据报道，cGAS/ 究中心，动物生产许可证号为SCXK（鄂）2020-0018。所
STING信号通路作为IFN-Ⅰ反应的关键诱导因素，与多 有大鼠均在温度23～24 ℃、光照12 h/黑暗12 h、相对湿
种神经退行性疾病中的神经炎症密切相关，且该通路激 度 50%～60% 的环境中适应性饲养 1 周后开展后续实
活后还会参与TBI后神经细胞死亡和功能障碍 [6―7] 。 验，饲养期间自由进食和饮水。本研究动物实验符合
灯盏花乙素（scutellarin，Scu）是一种从黄芩、灯盏花 《实验动物护理和使用指南》中相关要求，并通过了南阳
和半枝莲中提取的黄酮类化合物，具有抗炎、抗氧化和 医学高等专科学校第一附属医院医学伦理委员会批准
神经保护等多种药理作用 [8―9] 。已有研究表明，Scu通过 （伦理审查批号2022-6-7-2）。
抑制丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein ki‐ 2 方法
nase，MAPK）/核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路 2.1 TBI动物模型构建、分组与给药
抑制氧化应激和炎症反应，从而减轻脑缺血/再灌注大鼠 造模前大鼠禁食不禁水 12 h。随机抽取 24 只大鼠
[10]
的脑损伤 。但Scu对TBI后神经炎症的影响及其机制 作为假手术组，其余 100 只均采用改良 Feeney 法构建
尚不清楚。据此，本研究构建了 TBI 大鼠模型，着重观 TBI模型 ：腹腔注射2%戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉大
[11]
察了 Scu 对 TBI 大鼠神经炎症的影响以及 cGAS/STING 鼠，将其呈俯卧位固定于脑立体定位仪上，以 75% 乙醇
信号通路在此过程中的变化，以期为TBI治疗方法及相 消毒头皮后沿脑正中线左侧切开，暴露左顶骨，于冠状
关机制的阐明提供新思路。 缝后3 mm、矢状缝左3 mm处开一直径约5 mm的骨窗，
1 材料 并注意保持硬脑膜完整性；20 g 重锤从 25 cm 高度自由
1.1 主要仪器 落下，撞击硬脑膜，致大鼠左侧顶叶大脑皮质局灶性损
本研究所用主要仪器有：SA-100型大鼠脑立体定位 伤，止血后以碘伏清洗，缝合头皮。假手术组大鼠仅开
仪（上海玉研科学仪器有限公司）、DM IL LED型荧光显 骨窗，不进行撞击，其余操作同造模大鼠。若大鼠出现
微镜（德国Leica公司）、SpectraMax iD3型多功能酶标仪 短暂的呼吸暂停、四肢抽搐且昏迷2 h以上，则视为TBI
[12]
[美谷分子仪器（上海）有限公司]。 模型构建成功 。选取造模成功的大鼠96只，采用随机
1.2 主要药品与试剂 数字表法分为 TBI 组，Scu 低、高剂量组，cGAS 抑制剂
本研究所用的主要药品与试剂有：Scu 对照品、 组，每组24只。分组完成后，Scu低、高剂量组大鼠立即
cGAS抑制剂RU.521（美国MedChemExpress公司，批号 分别腹腔注射 40、80 mg/kg Scu[以二甲基亚砜（DMSO）
[10]
分别为 HY-N0751、HY-114180，纯度均不低于 98.56%）； 溶解后再以生理盐水稀释] ，并鼻内滴注等量的DMSO

· 2108 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 17 中国药房 2023年第34卷第17期