Page 74 - 《中国药房》2023年11期
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by regulating gut microbiota and liver metabolites.
KEYWORDS modified Xianfang huoming decoction; sepsis; gut microbiota; metabonomics; 16S rRNA technology; liver injury
脓毒症已成为临床常见的高发性危重症,在我国重 1.2 主要药品与试剂
症监护病房患者中的发病率高达20% 。脓毒症是由于 金银花、贝母、防风、白芷、陈皮、赤芍、天花粉、皂角
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宿主受到感染后,机体免疫系统中部分器官的应激反应 刺、甘草、桃仁、黄芩饮片均购自辽宁省药材有限责任公
失调所引发的综合征,严重者会导致休克及多器官脏器 司,经大连大学药用植物教研室苏明教授鉴定,均符合
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功能衰竭,甚至危及生命 。肝脏具有调控免疫微循环、 2020年版《中国药典》(一部)相关要求。地塞米松片(阳
平衡代谢紊乱及感知炎症反应的功能,在脓毒症早期参 性对照药,批号 14023304,规格 0.75 mg)购自山西同达
与物质代谢与氧化应激反应,但也常因炎症反应失调而 药业有限公司;脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)购自美
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造成肝损伤 。虽然临床上可采用抗氧化、抗感染、抗炎 国 Sigma 公司;白细胞介素 1β(interleukin-1β,IL-1β)、
等药物对脓毒症致肝损伤进行干预治疗,但治疗效果并 IL-6 和肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)
不理想。因此,深入探究其发病机制,并寻找一种理想 酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(批号分别为 EK-
的药物是治疗脓毒症致肝损伤的关键。 R36877、EK-R36902、EK-R38696)均购自上海酶研生物
科技有限公司;总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三
现代中医学研究多将脓毒症归于“外感热病”范畴,
酯(triglyceride,TG)、天冬氨酸转氨酶(aspartate amino‐
认为其病机与“热、毒、瘀、虚”的形成及代谢循环密不可
transferase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,
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分 。仙方活命饮原方出自《校注妇人良方》,是治疗热
ALT)试剂盒(批号分别为XY-TG-Ra、XY-TG-Ra、XY-AST-
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毒痈肿的常用方 。大连大学附属新华医院凭借多年临
Ra、XY-ALT-Ra)均购自上海信裕生物科技有限公司;
床经验,在保留仙方活命饮原方中金银花、陈皮、白芷、
DNA 文库试剂盒 (批号 P7589)购自美国 Invitrogen 公
赤芍、天花粉、皂角刺、甘草、贝母与防风这9味药配伍的
司;乙腈、甲醇为色谱醇,水为超纯水。
基础上,添加了黄芩与桃仁,以增加其清热解毒、活血化
1.3 动物
瘀与保肝的功效。该方在临床用于脓毒症的治疗效果
本研究所用动物为 SPF 级健康 SD 大鼠,共 60 只,
良好,尤其在缓解脓毒症致肝损伤方面的疗效显著。
4~5 周龄,雄性,体质量(200±20) g,购自辽宁长生生
16S rRNA技术是检测肠道菌群多样性的一种高通
物技术有限公司,实验动物生产许可证号为SCXK(辽)-
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量经典方法 。李玮等 应用 16S rRNA 技术研究发现,
2020-0001。大鼠购入后饲养于大连大学实验动物中
肠道微生态的失调可诱发脓毒症机体内部潜在致病菌
心,室温为(23±2) ℃,相对湿度为(50±5)%,自由饮
的生长,破坏肠道微环境的平衡,并导致肝损伤的发生。
水。所有实验大鼠的使用和喂养严格遵照动物保护协
代谢组学是研究生物样本在特定时期内所含低分子量
会所规定的有关条款。本研究通过了大连大学附属中
代谢产物的重要手段。如Thomaidou等 利用血清代谢
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山医院伦理委员会的伦理审查,伦理批号为20220307。
组学研究发现,脓毒症新生儿血清中左旋肉碱的含量远
2 方法
低于正常新生儿。本研究拟采用 16S rRNA 技术,联合
2.1 仙方活命饮加减方的制备
肝脏代谢组学分析方法,从肠道菌群与代谢组学的角度
取方中所有饮片(包含金银花15 g,贝母6 g,防风6
探究仙方活命饮加减方治疗脓毒症致肝损伤的作用机
g,白芷 3 g,陈皮 9 g,赤芍 12 g,天花粉 15 g,皂角刺 10
制,为其临床应用提供理论依据。
g,甘草10 g,桃仁10 g,黄芩10 g),加入8倍量水浸泡20
1 材料 min,煮沸后文火煎煮 30 min;煎煮 2 次,合并药液并过
1.1 主要仪器 滤。将滤液减压浓缩至以生药计质量浓度为 1 g/mL 的
本研究所用的主要仪器有 1290 型超高效液相色谱 复方药液。经 UHPLC 法测定,复方药液中绿原酸含量
(UHPLC)仪、6460 型质谱仪(美国 Agilent 公司)、5910R 为0.57%、黄芩苷含量为1.13%、芍药苷含量为0.36%。
型高速冷冻型离心机(德国 Eppendorf 公司)、XPR226 2.2 分组、造模与给药
CDR型电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)、Indiko 大鼠先适应性喂养 7 d,然后采用体质量均衡分配
Plus型全自动生化分析仪(美国Thermo Fisher Scientific 法将60只大鼠分为空白组、模型组、阳性对照药组(地塞
公司)。 米松片,5.0 mg/kg,为人临床等效剂量)和仙方活命饮加
· 1344 · China Pharmacy 2023 Vol. 34 No. 11 中国药房 2023年第34卷第11期