Page 74 - 《中国药房》2023年11期
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by regulating gut microbiota and liver metabolites.
          KEYWORDS     modified Xianfang huoming decoction; sepsis; gut microbiota; metabonomics; 16S rRNA technology; liver injury



              脓毒症已成为临床常见的高发性危重症,在我国重                          1.2 主要药品与试剂
          症监护病房患者中的发病率高达20% 。脓毒症是由于                               金银花、贝母、防风、白芷、陈皮、赤芍、天花粉、皂角
                                          [1]
          宿主受到感染后,机体免疫系统中部分器官的应激反应                            刺、甘草、桃仁、黄芩饮片均购自辽宁省药材有限责任公
          失调所引发的综合征,严重者会导致休克及多器官脏器                            司,经大连大学药用植物教研室苏明教授鉴定,均符合
                               [2]
          功能衰竭,甚至危及生命 。肝脏具有调控免疫微循环、                           2020年版《中国药典》(一部)相关要求。地塞米松片(阳
          平衡代谢紊乱及感知炎症反应的功能,在脓毒症早期参                            性对照药,批号 14023304,规格 0.75 mg)购自山西同达
          与物质代谢与氧化应激反应,但也常因炎症反应失调而                            药业有限公司;脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)购自美
                    [3]
          造成肝损伤 。虽然临床上可采用抗氧化、抗感染、抗炎                           国 Sigma 公司;白细胞介素 1β(interleukin-1β,IL-1β)、
          等药物对脓毒症致肝损伤进行干预治疗,但治疗效果并                            IL-6 和肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)
          不理想。因此,深入探究其发病机制,并寻找一种理想                            酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒(批号分别为 EK-
          的药物是治疗脓毒症致肝损伤的关键。                                   R36877、EK-R36902、EK-R38696)均购自上海酶研生物
                                                              科技有限公司;总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三
              现代中医学研究多将脓毒症归于“外感热病”范畴,
                                                              酯(triglyceride,TG)、天冬氨酸转氨酶(aspartate amino‐
          认为其病机与“热、毒、瘀、虚”的形成及代谢循环密不可
                                                              transferase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,
            [4]
          分 。仙方活命饮原方出自《校注妇人良方》,是治疗热
                                                              ALT)试剂盒(批号分别为XY-TG-Ra、XY-TG-Ra、XY-AST-
                        [5]
          毒痈肿的常用方 。大连大学附属新华医院凭借多年临
                                                              Ra、XY-ALT-Ra)均购自上海信裕生物科技有限公司;
          床经验,在保留仙方活命饮原方中金银花、陈皮、白芷、
                                                              DNA 文库试剂盒 (批号 P7589)购自美国 Invitrogen 公
          赤芍、天花粉、皂角刺、甘草、贝母与防风这9味药配伍的
                                                              司;乙腈、甲醇为色谱醇,水为超纯水。
          基础上,添加了黄芩与桃仁,以增加其清热解毒、活血化
                                                              1.3 动物
          瘀与保肝的功效。该方在临床用于脓毒症的治疗效果
                                                                  本研究所用动物为 SPF 级健康 SD 大鼠,共 60 只,
          良好,尤其在缓解脓毒症致肝损伤方面的疗效显著。
                                                              4~5 周龄,雄性,体质量(200±20) g,购自辽宁长生生
              16S rRNA技术是检测肠道菌群多样性的一种高通
                                                              物技术有限公司,实验动物生产许可证号为SCXK(辽)-
                    [6]
                              [7]
          量经典方法 。李玮等 应用 16S rRNA 技术研究发现,
                                                              2020-0001。大鼠购入后饲养于大连大学实验动物中
          肠道微生态的失调可诱发脓毒症机体内部潜在致病菌
                                                              心,室温为(23±2) ℃,相对湿度为(50±5)%,自由饮
          的生长,破坏肠道微环境的平衡,并导致肝损伤的发生。
                                                              水。所有实验大鼠的使用和喂养严格遵照动物保护协
          代谢组学是研究生物样本在特定时期内所含低分子量
                                                              会所规定的有关条款。本研究通过了大连大学附属中
          代谢产物的重要手段。如Thomaidou等 利用血清代谢
                                            [8]
                                                              山医院伦理委员会的伦理审查,伦理批号为20220307。
          组学研究发现,脓毒症新生儿血清中左旋肉碱的含量远
                                                              2 方法
          低于正常新生儿。本研究拟采用 16S rRNA 技术,联合
                                                              2.1 仙方活命饮加减方的制备
          肝脏代谢组学分析方法,从肠道菌群与代谢组学的角度
                                                                  取方中所有饮片(包含金银花15 g,贝母6 g,防风6
          探究仙方活命饮加减方治疗脓毒症致肝损伤的作用机
                                                              g,白芷 3 g,陈皮 9 g,赤芍 12 g,天花粉 15 g,皂角刺 10
          制,为其临床应用提供理论依据。
                                                              g,甘草10 g,桃仁10 g,黄芩10 g),加入8倍量水浸泡20
          1 材料                                                min,煮沸后文火煎煮 30 min;煎煮 2 次,合并药液并过
          1.1 主要仪器                                            滤。将滤液减压浓缩至以生药计质量浓度为 1 g/mL 的
              本研究所用的主要仪器有 1290 型超高效液相色谱                       复方药液。经 UHPLC 法测定,复方药液中绿原酸含量
         (UHPLC)仪、6460 型质谱仪(美国 Agilent 公司)、5910R              为0.57%、黄芩苷含量为1.13%、芍药苷含量为0.36%。

          型高速冷冻型离心机(德国 Eppendorf 公司)、XPR226                   2.2 分组、造模与给药
          CDR型电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)、Indiko                   大鼠先适应性喂养 7 d,然后采用体质量均衡分配
          Plus型全自动生化分析仪(美国Thermo Fisher Scientific            法将60只大鼠分为空白组、模型组、阳性对照药组(地塞
          公司)。                                                米松片,5.0 mg/kg,为人临床等效剂量)和仙方活命饮加


          · 1344 ·    China Pharmacy  2023 Vol. 34  No. 11                            中国药房  2023年第34卷第11期
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