Page 82 - 《中国药房》2022年14期

2.5.8 重复性试验 取同一批霸王花药材粉末（编号 3 讨论
S7）6份，精密称定，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液， 3.1 定性和定量分析指标的选择
再按“2.5.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标 现有研究表明，霸王花药材中含有丰富的黄酮类成
准曲线法计算样品含量。结果显示，山柰酚、异鼠李素 分，如山柰酚、异鼠李素、槲皮素等 。山柰酚具有润肺
[15]
含量的 RSD 分别为 0.47％、0.90％（n＝6），表明该方法 止咳、抗炎、抗氧化、抗肿瘤和防治动脉粥样硬化的作
重复性良好。 用 [16－17] ；异鼠李素具有抗支气管炎、抗氧化、抗肿瘤和降
2.5.9 加样回收率试验 取已知含量的霸王花药材粉 血压等作用 [10，18] 。山柰酚和异鼠李素的药理作用与霸王
末（编号 S7）6 份，每份约 0.1 g，精密称定，精密加入 花润肺止咳、抗氧化的药用功效相似，提示这2个成分可
“2.5.1”项下混合对照品溶液3 mL，按“2.5.2”项下方法制 能是该药的有效成分。因此，本研究选择山柰酚和异鼠
备供试品溶液，再按“2.5.3”项下色谱条件进样测定，记 李素作为霸王花药材定性和定量分析的指标成分。
录峰面积并计算加样回收率。结果显示，山柰酚、异鼠 3.2 TLC鉴别条件的选择
李素的平均加样回收率分别为 103.63％、98.00％，RSD 在TLC鉴别条件的选择中，本课题组考察了超声提
分别为 1.23％、1.15％（n＝6），表明本方法的准确度良 取法与回流提取法对鉴别结果的影响，结果显示，超声
好。结果见表4。 提取法所得供试品溶液的杂质斑点多，主斑点不明显，
表4 山柰酚和异鼠李素的加样回收率试验结果（n＝6） 故选择回流提取法；本课题组考察了不同薄层板对鉴别
称样量/ 已知量/ 加入量/ 测得量/ 加样回收率/ 平均加样回收率/ RSD/ 结果的影响，结果显示，山柰酚、异鼠李素与其他组分在
待测成分
g mg mg mg ％ ％ ％
硅胶 G 薄层板中难以有效分离，而选择 4％醋酸钠硅胶
山柰酚 0.117 4 0.301 2 0.301 1 0.616 6 104.75 103.63 1.23
0.117 8 0.302 3 0.301 1 0.610 6 102.39 G 薄层板则可得到理想的分离效果；本课题组参考文
0.117 7 0.302 0 0.301 1 0.618 1 104.98 献 [19－20] ，考察了三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10∶3∶1，V/V/V）、
0.117 5 0.301 5 0.301 1 0.616 3 104.55
0.117 2 0.300 7 0.301 1 0.608 2 102.13 正己烷-甲酸甲酯-甲酸（8 ∶ 4 ∶ 1，V/V/V）、石油醚-三氯甲
0.117 9 0.302 5 0.301 1 0.612 5 102.96 烷-甲酸乙酯-甲酸（2 ∶ 10 ∶ 3 ∶ 1，V/V/V）、甲苯-甲酸乙酯-
异鼠李素 0.117 4 0.200 4 0.176 2 0.369 9 96.20 98.00 1.15 甲酸（10 ∶ 5 ∶ 1，V/V/V）等不同展开剂对鉴别结果的影响，
0.117 8 0.201 1 0.176 2 0.373 8 98.01
0.117 7 0.200 9 0.176 2 0.376 5 99.66 最终选择了斑点清晰、圆整、分离度高、重复性好的甲
0.117 5 0.200 6 0.176 2 0.372 7 97.67 苯-甲酸乙酯-甲酸（10∶5∶1，V/V/V）作为展开剂。
0.117 2 0.200 1 0.176 2 0.373 6 98.47
0.117 9 0.201 3 0.176 2 0.374 0 98.01 3.3 高效液相色谱条件和供试品溶液制备条件的选择
2.5.10 样品含量测定 取 15 批霸王花药材粉末，每份 在高效液相色谱条件的优化研究中，本课题组通过
约0.5 g，精密称定，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液， 将对照品溶液和供试品溶液于200～600 nm波长范围内
再按“2.5.3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标 进行光谱扫描，筛选出山柰酚、异鼠李素的最大吸收波
准曲线法计算样品含量。每批样品平行测定3次，取平 长（362 nm）。本课题组对流动相组成（甲醇-水、甲

均值（表5）。结果显示，15批霸王花样品中山柰酚和异 醇-0.4％磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-0.4％磷酸溶液）、甲
鼠李素含量分别为 1.787～3.785、0.597～2.211 mg/g。 醇-0.4％磷酸溶液比例（50 ∶ 50、53 ∶ 47、55 ∶ 45，V/V）、
[14]
因不同产地含量差异较大，故以含量最低值设限 ，即 流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）等色谱条件进行了考察，对比
按干燥品计算，初步拟定霸王花药材中山柰酚和异鼠李 各成分分离度及基线平稳情况，最终选定“2.5.3”项下色
素含量分别不得少于1.780、0.590 mg/g。 谱条件。此外，本课题组还考察了样品提取方式（超声
表5 15批霸王花药材中山柰酚和异鼠李素的含量测定 提取、回流提取）、提取溶剂（甲醇、水）、盐酸浓度（1、2、
[21]
结果（n＝3，mg/g） 3、4、5 moL/L）等供试品溶液的制备条件 ，最终选择了
待测成分色谱峰峰形对称无拖尾、杂质峰种类少且响应
编号 山柰酚 异鼠李素 编号 山柰酚 异鼠李素
S1 2.809 1.253 S9 3.062 2.169 较弱的“2.5.2”项下供试品溶液制备条件。
S2 2.567 1.118 S10 1.787 0.597 3.4 样品含量测定结果分析
S3 2.512 1.444 S11 3.785 1.816
S4 1.902 1.094 S12 2.264 2.011 本研究表明，不同省份、同一省份不同产地之间的
S5 1.979 0.804 S13 3.425 1.373 霸王花药材成分含量差异较大：广西6个产地样品中山
S6 2.764 1.242 S14 2.451 2.211
S7 2.566 1.707 S15 2.638 1.334 柰酚的含量为 1.902～2.809 mg/g，异鼠李素的含量为
S8 2.434 1.368 0.804～1.444 mg/g；广东 9 个产地样品山柰酚的含量为

·1740 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 14 中国药房 2022年第33卷第14期